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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 酶切
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zhangchong12

新虫 (小有名气)

[求助] 酶切 已有6人参与

为什么质粒提取有天带 酶切后跑电泳却没有条带

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-04-11 07:18:21
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jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你确定点上样了吗？此外提取的质粒有几条带，如果只有一条那就错了
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2楼2015-04-11 20:48:54
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zhangchong12

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiqinger at 2015-04-11 20:48:54
你确定点上样了吗？此外提取的质粒有几条带，如果只有一条那就错了

质粒跑电泳时确实只有一条带 不就只能跑出一条带么

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2015-04-11 21:27:10
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zhangchong12

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangchong12 at 2015-04-11 21:27:10
质粒跑电泳时确实只有一条带 不就只能跑出一条带么
...

提取的质粒吸了几微跑了电泳有一条条带，今天做了质粒Pcr也有条带，用的载体的通用引物，可是酶切却不行

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4楼2015-04-11 21:33:09
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jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangchong12 at 2015-04-11 21:27:10
质粒跑电泳时确实只有一条带 不就只能跑出一条带么
...

质粒是有一条明显的带，后面还有几条不清晰的带。
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123456
5楼2015-04-12 10:50:29
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yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是有三条带，不过我试过一条带也能切出来。会不会是时间，温度或者buffer的问题？
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努力打败一切
6楼2015-04-12 22:38:08
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sunnypanda

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
怎么会酶切后没有条带了呢 好奇怪啊 质粒跑电泳的时候应该是不止一条带 一条很粗的带 质粒有三种形式存在 所以在粗带周围还会有很弱的带存在 酶切后的胶配的有问题没呢？酶切的时候是不是质粒加的太少了呢？计算了量再加酶~
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7楼2015-04-13 09:25:47
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shenma521

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒电泳有条带
酶切后就没条带了或显示为弥散状态
解决方法：
可以考虑先乙醇沉淀纯化下你的质粒
酶切的时候，内切酶按照这样的比例加
1ug DNA加10U内切酶加适合的Buffer、H20。 放置37度（根据酶来选择） 15min后就取出跑电泳。就完事了
有些酶不能切长时间，时间长了都切没了。
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8楼2015-04-13 09:29:07
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wyjwyjwyj1

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是该质粒有很多个你用的那个酶的酶切位点？把质粒都切成小于100bp的小片段了？

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9楼2015-04-13 10:15:38
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xiaolinlhy

木虫 (小有名气)

屎奔工

【答案】应助回帖

提高质粒的浓度，例如提高菌浓度和减少最后一步洗脱液的用量。我做酶切的时候都是质粒跑的非常亮才进行酶切的。
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万物逃不过自然法则！
10楼2015-04-15 11:01:38
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