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[交流]
酵母表达
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1.我最近在做毕赤酵母GS115表达小分子量蛋白。 得到了10个已经转入目的DNA的酵母单克隆，并对每个单克隆进行PCR检验。 我用a-factor引物和3‘-aox对所提的酵母DNA进行pcr， 结果得到目的带300bp左右，但是在500bp左右还有一条带，不知道是怎么回事了。 图一maker为100bp ladder，右边数第一个样品的质粒是ppic9k线性化后转入GS115中，目的片段是500bp是一条带。 其余样品都是我用的是ppiczaA线性化后转入GS115中的，引物全是a-factor引物和3‘-aox。  2. 后来我又用我目的片段的一段引物和3’-aox引物对 酵母DNA重新PCR 结果 有我的目的片段，但是还是有一段接近但小于500bp的序列。见图二从左到右 1引物为a-factor引物和3‘-aox 2引物为目的片段的一段引物和3’-aox引物 1和2模板是一个酵母 3引物为a-factor引物和3‘-aox 4引物为目的片段的一段引物和3’-aox引物 3和4模板是另一个酵母 其余样品与本实验无关  3.还有下边是我从左到右 1为100bp ladder marker 2是用a-factor和3‘-aox引物 3是用我的目的片段引物 和3’-aox引物对线性化的ppiczaA质粒的pcr结果。  我不懂了 为什么我会从酵母里pcr出两条带？ 而且为什么ppic9k转入酵母的pcr结果是一条带，而ppiczaA转入酵母的pcr结果却是两条带呢？ 请高手给予指点！！ [ Last edited by fengkai6200 on 2008-7-2 at 20:33 ] |
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