| 查看: 208 | 回复: 5 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 fengkai6200 的 6 个金币 | |||
[交流]
酵母表达
|
|||
|
1.我最近在做毕赤酵母GS115表达小分子量蛋白。 得到了10个已经转入目的DNA的酵母单克隆，并对每个单克隆进行PCR检验。 我用a-factor引物和3‘-aox对所提的酵母DNA进行pcr， 结果得到目的带300bp左右，但是在500bp左右还有一条带，不知道是怎么回事了。 图一maker为100bp ladder，右边数第一个样品的质粒是ppic9k线性化后转入GS115中，目的片段是500bp是一条带。 其余样品都是我用的是ppiczaA线性化后转入GS115中的，引物全是a-factor引物和3‘-aox。  2. 后来我又用我目的片段的一段引物和3’-aox引物对 酵母DNA重新PCR 结果 有我的目的片段，但是还是有一段接近但小于500bp的序列。见图二从左到右 1引物为a-factor引物和3‘-aox 2引物为目的片段的一段引物和3’-aox引物 1和2模板是一个酵母 3引物为a-factor引物和3‘-aox 4引物为目的片段的一段引物和3’-aox引物 3和4模板是另一个酵母 其余样品与本实验无关  3.还有下边是我从左到右 1为100bp ladder marker 2是用a-factor和3‘-aox引物 3是用我的目的片段引物 和3’-aox引物对线性化的ppiczaA质粒的pcr结果。  我不懂了 为什么我会从酵母里pcr出两条带？ 而且为什么ppic9k转入酵母的pcr结果是一条带，而ppiczaA转入酵母的pcr结果却是两条带呢？ 请高手给予指点！！ [ Last edited by fengkai6200 on 2008-7-2 at 20:33 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
拟解决的关键科学问题还要不要写
已经有8人回复
-
最失望的一年
已经有12人回复
-
存款400万可以在学校里躺平吗
已经有29人回复
-
求推荐英文EI期刊
已经有5人回复
-
请教限项目规定
已经有4人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有20人回复
-
26申博
已经有3人回复
-
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有10人回复
-
基金申报
已经有6人回复
-
疑惑？
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
2楼2008-07-03 11:11:40
3楼2008-07-05 09:11:33
seahow
木虫 (著名写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1691.1
- 红花: 1
- 帖子: 1778
- 在线: 65.2小时
- 虫号: 78970
- 注册: 2005-07-07
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
4楼2008-07-05 11:12:50
5楼2008-07-06 18:58:52