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[求助]
ROS活性氧检测中如何去除悬浮细胞中的未进入细胞的DCFH-DA 已有1人参与
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| 说明书上只有贴壁细胞的方法。我自己的想法是通过先离心去上清液然后又加入培养液重悬再离心，反复几次来清洗，但是这样会损失细胞，影响活性氧水平检测的结果。求教有没有好的方法解决这个问题。（我实验用的细胞是悬浮细胞，不是贴壁细胞） |
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饿的神啊
新虫 (著名写手)
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- 性别: MM
- 专业: 植物病理学
【答案】应助回帖
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楼主你的问题解决没有啊？我也想用ROS检测试剂盒，发现适用于贴壁细胞，可我的材料是植物叶片，发现篇文献，可是细节方面描述的不清楚，所以想请教一下楼主 Leaf tissue from wild-type tobacco and tobacco constitutively expressing HopG1–HA was ground in liquid nitrogen and resus- pended in ice-cold 10 mM Tris-HCl, pH 7.3. Samples were centrifuged twice to remove cell debris and 0.1 ml of the supernatant was placed in duplicate on a Microfluor ®1 white wellplate (Thermo Scientific, http://www.thermofisher.com). 2′-7′- dichlorodihydrofluorescein diacetate (H2DCFDA, Invitrogen, http://www.Invitrogen.com) to a final concentration of 10 mM was added to the wells and mixed. Fluorescence was measured with an excitation wavelength of 485 nm and an emission wavelength of 535 nm on a CaryEcilpse fluorometer. Protein content was determined by the Bradford assay and relative basal ROS levels calculated with wild-type tobacco were set to 1. |
2楼2015-07-15 10:10:11
