| 查看: 427 | 回复: 4 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 wwfifa 的 4 个金币 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
请问pet28表达质粒中连接目的片段使用那两个酶切位点
|
|||
| 各位大虾们，使用pcr产物直接进行酶切，然后连接到载体，但使用的酶切位点分别为：EcoR I和Not I,请问这两个位点能否一起使用啊，是否能高效率连到载体中啊，连到好多次，费了二个月了，还没连上，都快急死了，望各位多建言，出主意啊，多谢了！ |
回复此楼» 猜你喜欢
生物学学硕，一志愿湖南大学，初试成绩338
已经有6人回复
-
321求调剂
已经有7人回复
-
343求调剂
已经有4人回复
-
305求调剂
已经有3人回复
-
本科新能源科学与工程，一志愿华理能动285求调剂
已经有6人回复
-
332求调剂
已经有3人回复
-
学硕274求调剂
已经有8人回复
-
压国家一区线，求导师收留，有恩必谢！
已经有7人回复
-
081200-11408-276学硕求调剂
已经有4人回复
-
22408 359分调剂
已经有4人回复
4楼2008-07-02 20:45:13
|
1，保证PCR引物加的酶切位点要有足够的保护碱基、 2，EcoR 1,Not 1能不能一起使用，可以查一下有关酶的产品说明书或向酶的供应商咨询。比如， 3,感受态也很关键，保证感受态的转化效率达到要求。不然购买高效率的感受态也可以。 连接体系也优化一下了。 4，用笨但稳妥的方法：连接到T载体上，然后在酶切连接。 4，严格操作，细节决定成败。 5，不要灰心，相信自己！ 俺构建一个表达载体做了2个多月，弄得信心全无，怀疑自己是不是干这个的料。今天才发现其实我做出来了，只是一直酶切没条带。 后来发现是质粒量太少，酶切鉴定不成功。 明天诱导表达。哈哈， 你也加油啊，相信自己。 [ Last edited by xiaoyur on 2008-6-30 at 20:14 ] |
2楼2008-06-30 20:12:57
3楼2008-07-01 17:01:15
5楼2008-07-02 20:54:36
