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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 原核表达
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jinxuan0904

木虫 (正式写手)

[求助] 原核表达 已有3人参与

原核表达载体构建成功了，pet-30a,pet-28a,pet-32a，但都不表达，使用的是IPTG,1mM/L,BL21(DE3)表达菌，37度，诱导6h，不表达，又要疯了！咋办呢？
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1楼 2015-03-31 20:48:27
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xiaojizhi

新虫 (初入文坛)
1mMIPTG是不是太多了，改成0.1试一下吧

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-03-31 21:02:20
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zhang6871

银虫 (正式写手)
更换载体试一试
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过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
3楼2015-03-31 22:47:09
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mmcniu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-04-01 09:27:47
目的基因密码子优化过吗？如果是真核生物的基因，建议优化密码子，用transetta表达试试，不表达就只能换。。。换条件，换宿主，换载体。。。
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4楼2015-03-31 23:10:17
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
5楼2015-04-01 10:19:09
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linxiaolin08

捐助贵宾 (初入文坛)
求帮助。我遇到了跟楼主一样的问题。楼主你现在还卡在这嘛？我跟实验室一个同学一起做诱导然后跑SDS-PAGE胶，确定载体构建成功，但是诱导前后条带没有差别，空载体和表达载体也没有区别。我们分别用了0.1,0.5,1浓度的IPTG诱导37℃4小时，都没有区别...现在我俩都不知道该怎么办了...请问你现在解决了嘛？
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6楼2015-04-23 09:47:18
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九根手指

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by linxiaolin08 at 2015-04-23 09:47:18
求帮助。我遇到了跟楼主一样的问题。楼主你现在还卡在这嘛？我跟实验室一个同学一起做诱导然后跑SDS-PAGE胶，确定载体构建成功，但是诱导前后条带没有差别，空载体和表达载体也没有区别。我们分别用了0.1,0.5,1浓度 ...

请问你们的问题解决了吗？我也遇到了类似的问题，希望有好的建议。
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中国农业科学院作科所
7楼2016-03-24 11:23:55
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