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Ceci818

新虫 (初入文坛)

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虫号: 2678399
注册: 2013-09-24
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] PCR产物与PMD18-T连接不上已有7人参与

易错PCR产物回收后与pMD18-T连接，几乎都长蓝斑，长出两种蓝斑，一种是中间蓝色，边缘近白色，一种是全部都是蓝色的。连接时间是过夜连接，12-16h。有一次连接后长出蓝白斑，但是挑出的白斑做PCR验证之后都是假阳性。求各位大神相助。问题出现在哪里？求帮助！

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1楼 2015-03-30 16:15:33

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

Ceci818

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

8楼: Originally posted by 墨尔本机器 at 2015-03-31 09:42:07
请问你如何回收的？竟然能打到283.4ng每微升！！！还有就是你用的是taq酶吗？不要弄了半天你的PCR反应不会自动加A，那样无论如何也连接不上了。还有啊，你回收产物浓度这么高，为啥不直接送测...

每管50μ的体系，p了8管，回收了3管。就达到这个浓度了。用的是rtaq酶。有加A吖。那我直接送测好了。只是一直做不出来也很奇怪。所以不懂什么原因。