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露的想念

新虫 (小有名气)

[求助] 怎么才能把WB的内参调齐啊?大家交流一下。 已有2人参与

RT: 我是收完样品之后,离心取上清,然后用BCA测浓度,之后使每个样品的体积和浓度一样,浓度大的用PBS补齐,加入相同体积的loading buffer,95度煮样10min,我觉得我的方法没问题啊?但是每次跑出来ACTIN 都不齐,很明显,感觉很奇怪,难道是手法有问题,大家帮我分析分析吧!多谢!
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chenzq1993

新虫 (初入文坛)

计算出来多大浓度就是多大浓度
按照同质量上样,     这样每个样上样体积是不同的
先跑一次,根据结果再微调
你也能看出  不同体积之间差别有多大
多做几次   就有经验了
15楼2015-04-14 10:36:21
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sdu_max

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
两块胶。😁

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-03-28 23:11:34
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SAM001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
露的想念: 金币+50, ★★★很有帮助 2015-03-29 13:51:39
如果你选择生长情况相同的细胞,无需测浓度,加相同体积的buffer以后直接煮样品就可以了。
如果你表达某些影响细胞生长的基因,你可以做一次不同梯度稀释队的western摸一下条件。例如我表达一个与细胞死亡相关的细胞时候,我会适当增加WT的buffer量,稀释WT细胞,达到平衡
3楼2015-03-29 12:37:28
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露的想念

新虫 (小有名气)

但是觉得自己种的板子,不是特别匀,这样直接加buffer煮样,actin肯定不齐啊,目的基因没法比较,不太懂你们的意思啊
4楼2015-03-29 13:21:25
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