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[求助]
怎么才能把WB的内参调齐啊？大家交流一下。 已有2人参与
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| RT: 我是收完样品之后，离心取上清，然后用BCA测浓度，之后使每个样品的体积和浓度一样，浓度大的用PBS补齐，加入相同体积的loading buffer，95度煮样10min，我觉得我的方法没问题啊？但是每次跑出来ACTIN 都不齐，很明显，感觉很奇怪，难道是手法有问题，大家帮我分析分析吧！多谢！ |
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13楼2015-03-29 15:25:46
2楼2015-03-28 23:11:34
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
露的想念: 金币+50, ★★★很有帮助 2015-03-29 13:51:39
感谢参与，应助指数 +1
露的想念: 金币+50, ★★★很有帮助 2015-03-29 13:51:39
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如果你选择生长情况相同的细胞，无需测浓度，加相同体积的buffer以后直接煮样品就可以了。 如果你表达某些影响细胞生长的基因，你可以做一次不同梯度稀释队的western摸一下条件。例如我表达一个与细胞死亡相关的细胞时候，我会适当增加WT的buffer量，稀释WT细胞，达到平衡 |
3楼2015-03-29 12:37:28
4楼2015-03-29 13:21:25
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30