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实验没有结果，请高手指点！（rt-pcr）
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各位战友：我做实验遇到了很棘手的问题，希望高手点拨一下。 我提的RNA已经检测过了，应该没有问题。反转录体系如下：RNA 3UL,OLIGOD(T) 1 UL, DTT 1UL,第一链合成BUFFER 2ul ，0.5ul的DNTP，0.5ulRI ,0.5ulSuper SCRIPTII 反转录酶 ，补水至10ul。在做反转录前取2ulRNA，65度水浴5分钟然后冰裕。接下来PCR。这个体系有问题吗？ 上游:CCCACACAGTCGCTCCATAG 57.8度 下游:AATCCTCGGTCCTTGCGTAG 57.9度 PCR反应体系如下： 1：10Xbuffer:2.5UL 2：引物各20UM 0.5uL 3：mgcl2(25mM)1.5uL 4：dNTP(2.5mM)4ul 5：模板加1ulcDNA. 6：rTaq酶0.5ul， 7：最后补水至25uL. 反应条件为: 1: 94度3分钟, 2: 94度30秒 3：（52-62）度30秒 4:72度2分钟 5:重复2-4 33到35个循环 6:72度10分钟 可为什么一直不出条带啊？真的很着急啊！到底是哪个地方出了问题啊？ |
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