应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【交流求助】请高手赐教His tag的PCR引物设计
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 613  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

cmtoon

木虫 (正式写手)

[交流] 【交流求助】请高手赐教His tag的PCR引物设计

下面是我设计的目的基因上下游引物：其中上游加了kozak序列和酶切位点，下游加了组氨酸标签和酶切位点，不知什么原因，PCR反应出不来目的条带？还有就是帮忙分析一下kozak序列是否正确？请高手帮忙分析一下，不胜感激！
up primer：5’CGCGGATCCGCACCATGTCGGCGCAGGCGGC3’
down primer：5’CCGGAATTCGCGTTA GTG GTG GTG GTG GTG GTG GTCATCTTCTCCTTCATCCT3’
[search]his tag[/search]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-06-26 09:03:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cmtoon

木虫 (正式写手)
多谢仁兄的意见。我也是很怀疑我设计的KOZAK序列啊。那我再合成条引物试试，呵呵。
赞一下 回复此楼
3楼2008-06-27 22:51:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

zyk_527

银虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
根据 Kozak序列：——G/N-C/N-C/N-ANNATGG——，感觉你的CGCACCATGT应该改为GCCACCATGG

[ Last edited by zyk_527 on 2008-7-11 at 14:48 ]
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2008-06-27 21:00:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zyk_527

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+4,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
其实PCR结果和KOZAK序列没有大影响呀，你分析过你的两条引物的退火温度了吗？相差大吗？你做过多少范围的温度梯度？温度确定不好，你可以加大引物的浓度（可10倍到100mM），假如温度非要很低才能扩出来，但非特异性高的话，你可以用2步法扩，先低温3-5个循环（可更少循环），再升高温度来25-30个循环。还有什么问题，我们互相讨论。祝你成功
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-06-28 13:10:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zyk_527

银虫 (小有名气)
你组氨酸也可以这样ATGGTGATGGTGATGATG，没必要都是GTG，这样会使CG含量过高的啦
赞一下 回复此楼
5楼2008-06-28 13:16:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 320分，材料与化工专业，求调剂 +6 一定上岸aaa 2026-03-27 8/400 2026-03-28 03:56 by fmesaito
[考研] 352分 化工与材料 +5 海纳百川Ly 2026-03-27 5/250 2026-03-28 03:39 by fmesaito
[考研] 085701环境工程，267求调剂 +12 minht 2026-03-26 12/600 2026-03-27 22:22 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +4 零八# 2026-03-27 4/200 2026-03-27 18:07 by yu221
[考研] 一志愿南师大0703化学 275求调剂 +4 Ripcord上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-27 17:00 by zhyzzh
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 12/600 2026-03-27 14:43 by shangxh
[考研] 303求调剂 +7 安忆灵 2026-03-22 8/400 2026-03-27 11:46 by sanrepian
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 求调剂 +6 林之夕 2026-03-24 6/300 2026-03-27 08:38 by hypershenger
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 081700 调剂 267分 +11 迷人的哈哈 2026-03-23 11/550 2026-03-26 15:41 by zzll406
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭