| 查看: 2065 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
pLent-puro-CMV建稳定高表达 已有2人参与
|
||
|
pLent-puro-CMV建稳定高表达细胞，用puro 筛选到第六天，突然细胞都死得差不多了，后来换成正常培养基，细胞也在死，状态很差救不活了。做了两次，一次质粒是氯化铯大提，一次是去毒素大提试剂盒做的质粒，质粒应该没有问题； 构建同时做了别的质粒，说明转染系统应该也没有问题。 请问大侠们，，咋回事呢？？？ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有241人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 招聘稳定细胞株构建研发人员（有CHO细胞，293细胞表达经验者优先）
已经有12人回复
- 蛋白的表达量低不稳定怎么办
已经有11人回复
- 【分享】G418筛选稳定表达细胞系
已经有17人回复
junior850621
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 11151.1
- 红花: 7
- 帖子: 1045
- 在线: 517.5小时
- 虫号: 868883
- 注册: 2009-10-11
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
7楼2015-03-27 14:38:16
sc5921041
木虫 (著名写手)
- 应助: 94 (初中生)
- 金币: 9264.5
- 散金: 2259
- 红花: 8
- 帖子: 2226
- 在线: 290.8小时
- 虫号: 1386416
- 注册: 2011-09-01
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
2楼2015-03-25 04:16:15
junior850621
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 11151.1
- 红花: 7
- 帖子: 1045
- 在线: 517.5小时
- 虫号: 868883
- 注册: 2009-10-11
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
leilaye: 金币+11, ★★★★★最佳答案 2015-03-25 21:25:05
感谢参与，应助指数 +1
leilaye: 金币+11, ★★★★★最佳答案 2015-03-25 21:25:05
|
1，转染也没问题的结论是你同时瞬转了其他质粒吗？有荧光标记的还是什么让你觉得没问题？ 2，抽滤病毒用0.45还是0.22滤器？0.22会让一部分病毒失活。 3，puro筛6天的做法是怎样决定的？不知道你做的什么细胞。我感染的绝大部分细胞puro筛选不超过48小时（T47D最长96小时）。puro我用的是sigma的；也用过上海某s品牌的，真心不能用。建议同时做一个对照，没有感染过病毒的同种细胞，类似密度，同时加同样量的puro。当对照接近全死的时候立刻换液。不要等所谓的6天还是多少天。 |
3楼2015-03-25 19:19:42
4楼2015-03-25 21:24:40
28