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pLent-puro-CMV建稳定高表达 已有2人参与
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pLent-puro-CMV建稳定高表达细胞，用puro 筛选到第六天，突然细胞都死得差不多了，后来换成正常培养基，细胞也在死，状态很差救不活了。做了两次，一次质粒是氯化铯大提，一次是去毒素大提试剂盒做的质粒，质粒应该没有问题； 构建同时做了别的质粒，说明转染系统应该也没有问题。 请问大侠们，，咋回事呢？？？ |
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4楼2015-03-25 21:24:40
sc5921041
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2楼2015-03-25 04:16:15
junior850621
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
leilaye: 金币+11, ★★★★★最佳答案 2015-03-25 21:25:05
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leilaye: 金币+11, ★★★★★最佳答案 2015-03-25 21:25:05
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1，转染也没问题的结论是你同时瞬转了其他质粒吗？有荧光标记的还是什么让你觉得没问题？ 2，抽滤病毒用0.45还是0.22滤器？0.22会让一部分病毒失活。 3，puro筛6天的做法是怎样决定的？不知道你做的什么细胞。我感染的绝大部分细胞puro筛选不超过48小时（T47D最长96小时）。puro我用的是sigma的；也用过上海某s品牌的，真心不能用。建议同时做一个对照，没有感染过病毒的同种细胞，类似密度，同时加同样量的puro。当对照接近全死的时候立刻换液。不要等所谓的6天还是多少天。 |
3楼2015-03-25 19:19:42
junior850621
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5楼2015-03-26 13:11:20
28
