应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 质粒构建
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
61/1返回列表
查看: 680  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

?R逍遥游

铁虫 (初入文坛)

[求助] 质粒构建 已有1人参与

求助，我要构建个表达质粒，从PBMC里提取RNA，逆转录得到的CDNA，然后以CDNA为模板PCR，切胶回收，酶切连接，构建好质粒，转化到DH5a中，涂板，菌落PCR，后挑取的阳性克隆，摇菌，提取质粒，送去2个侧序后，发现2个质粒分别单点突变，点突变的位置都不一样。然后加测了反向之后，发现还是和前面结果一样。求高手指点。该怎么办，是怎么回事？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-03-23 14:36:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-03-24 09:19:11
其实你不需要加测反向的，应该增加送样量，送4个或者5个都行，再挑一个正确的往下做
赞一下 回复此楼
没有做不到，只有想不到！
2楼2015-03-23 15:07:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

?R逍遥游

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 王平阳 at 2015-03-23 15:07:31
其实你不需要加测反向的，应该增加送样量，送4个或者5个都行，再挑一个正确的往下做

可是为什么会出现这种情况呢？在增加送样量，会有正确的吗？我后来又送了一个，还是这种情况。有新的点突变，不是同一个位置。
赞一下 回复此楼
3楼2015-03-23 15:53:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

艰苦温度

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ?R逍遥游 at 2015-03-23 15:53:38
可是为什么会出现这种情况呢？在增加送样量，会有正确的吗？我后来又送了一个，还是这种情况。有新的点突变，不是同一个位置。...

最直接就是把突变的点突变回来
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2015-03-23 16:51:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-03-24 09:19:16
?R逍遥游: 金币+6, ★★★很有帮助, 谢谢了 2015-03-24 09:22:17
引用回帖:
3楼: Originally posted by ?R逍遥游 at 2015-03-23 15:53:38
可是为什么会出现这种情况呢？在增加送样量，会有正确的吗？我后来又送了一个，还是这种情况。有新的点突变，不是同一个位置。...

这些点突变是由于PCR错配造成的，增加送样量，会有正确的，我之前也做过原核表达，一次送了6各样测序，才有2个是完全正确的
赞一下(1人) 回复此楼
没有做不到，只有想不到！
5楼2015-03-23 22:19:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

带锁的季节

银虫 (小有名气)
把你验证好的再多送几个，实在不行重新连
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2015-03-24 15:13:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ?R逍遥游 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +15 一样YWY 2026-04-02 15/750 2026-04-03 15:39 by 晴空210210
[考研] 320求调剂 +5 振—TZ 2026-04-02 5/250 2026-04-03 14:42 by fxue1114
[考研] 265求调剂 +16 林深温澜 2026-04-01 19/950 2026-04-03 11:24 by zhangdingwa
[考研] 环境285分，过六级，求调剂 +9 xhr12 2026-04-02 9/450 2026-04-03 10:23 by 化学化工硕士招�
[考研] 一志愿山东大学化学与化工学院材料与化工专硕，360分求调剂 +4 不愿透露姓名的� 2026-04-02 4/200 2026-04-03 09:29 by 遗忘消失的灆
[考研] 一志愿a区211，085601-307分求调剂 +13 党嘉豪 2026-03-31 26/1300 2026-04-03 08:33 by 495374996
[考研] 302求调剂 +9 zyx上岸！ 2026-04-02 9/450 2026-04-02 23:07 by 马儿快快地跑
[考研] 294求调剂 +3 Grey_Ey 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:34 by swb0218
[考研] 一志愿华南师范大学-22408计算机-292分-求华南师范大学调剂 +4 爱读书的小鳄鱼 2026-04-02 4/200 2026-04-02 18:35 by 求调剂zz
[考研] 材料专业求调剂 +10 月月鸟木 2026-04-01 10/500 2026-04-02 12:57 by wxiongid
[考研] 考研调剂 +12 Amber00 2026-03-31 12/600 2026-04-02 09:04 by sanrepian
[考研] 295材料工程专硕求调剂 +19 1428151015 2026-03-27 19/950 2026-04-01 22:34 by peike
[考研] 0817化工学硕调剂 +11 努力上岸中！ 2026-03-31 11/550 2026-04-01 20:30 by 赖春艳
[考研] 290求调剂 +5 dfffsar 2026-03-29 5/250 2026-04-01 19:45 by 6781022
[考研] 材料专硕306英一数二 +7 z1z2z3879 2026-03-31 7/350 2026-04-01 14:50 by ZXlzxl0425
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +6 hanamiko 2026-03-29 6/300 2026-03-31 16:35 by hypershenger
[考研] 085601 329分调剂 +6 yzsa12 2026-03-31 6/300 2026-03-31 15:23 by yanflower7133
[考研] 348求调剂 +6 小懒虫不懒了 2026-03-28 6/300 2026-03-30 10:29 by Evan_Liu
[考研] 一志愿中南大学化学0703总分337求调剂 +6 niko- 2026-03-27 6/300 2026-03-30 10:25 by herarysara
[考研] 272求调剂 +7 脚滑的守法公民 2026-03-27 7/350 2026-03-27 17:23 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭