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l9685

金虫 (小有名气)

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专业: 环境微生物学

[交流] 怎样从聚丙烯酰胺上回收蛋白

我想从PAGE胶回收蛋白,不知道有什么方法比较好,希望各位帮帮忙~谢谢!

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1楼 2008-06-24 22:27:38

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zyk_527

银虫 (小有名气)

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注册: 2008-05-13
性别: GG
专业: 分子生物学

在普通SDS—PAGE上、下电泳槽中加入适量的电洗脱液，将装好的透析袋放入上槽中，再装好电泳槽，100 V电压，洗脱2 h(建议最后将电极接反，再跑5-10分钟）。洗脱完毕后，将透析袋中溶液取出，并弃去碎胶，溶液用SDS—PAGE电泳检查效果。鉴定后正确的蛋白溶液装入透析袋中，用PBS溶液于4℃下透析过夜。其间换PBS溶液2～3次。透析好的蛋白冻干浓缩。
回收率，俺觉得极低。有个30-40%就不错了

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8楼2008-06-27 21:06:23

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sohu123456

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帖子: 211
在线: 178小时
虫号: 69912
注册: 2005-05-24
性别: GG
专业: 作物杂种优势及其利用

摘抄别人论文中的方法

10%SDS-PAGE分离纯化蛋白，考马斯亮蓝染色。然后用干净的刀片小心切下目的蛋白条带，将胶块先用100μl 50mM的NH4HCO3和100μl 50%CH3CN洗30min，后用50mM NH4HCO3溶液洗30min，以除去考马斯亮蓝染料。将脱色后的胶块冷冻干燥后，送样进行质谱分析

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2楼2008-06-24 22:35:26

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zyk_527

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 557684
注册: 2008-05-13
性别: GG
专业: 分子生物学

★ ★ ★ ★ ★
l9685(金币+5,VIP+0):能不能有个具体点的方法?谢谢

切下目的分子量胶块，放入相应透析袋中灌入电泳缓冲液，电泳至胶块由蓝变透明，弃去胶块，泡透析液中过夜，中间换一到两次透析液，冰冻干燥收集粉末

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3楼2008-06-25 08:49:41

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jasco

木虫 (正式写手)

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红花: 3
帖子: 991
在线: 82小时
虫号: 287776
注册: 2006-10-21
专业: 生物化学

引用回帖:

Originally posted by zyk_527 at 2008-6-25 08:49:
切下目的分子量胶块，放入相应透析袋中灌入电泳缓冲液，电泳至胶块由蓝变透明，弃去胶块，泡透析液中过夜，中间换一到两次透析液，冰冻干燥收集粉末

我做的基本方法相同，就是最后没有干燥，只是浓缩而已

如果有制备型跑胶设备就好了

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4楼2008-06-25 08:56:24

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