应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎样从聚丙烯酰胺上回收蛋白
81/1返回列表
查看: 994  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

l9685

金虫 (小有名气)

[交流] 怎样从聚丙烯酰胺上回收蛋白

我想从PAGE胶回收蛋白,不知道有什么方法比较好,希望各位帮帮忙~谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-06-24 22:27:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sohu123456

捐助贵宾 (小有名气)

摘抄别人论文中的方法

10%SDS-PAGE分离纯化蛋白，考马斯亮蓝染色。然后用干净的刀片小心切下目的蛋白条带，将胶块先用100μl 50mM的NH4HCO3和100μl 50%CH3CN洗30min，后用50mM NH4HCO3溶液洗30min，以除去考马斯亮蓝染料。将脱色后的胶块冷冻干燥后，送样进行质谱分析
赞一下 回复此楼
2楼2008-06-24 22:35:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zyk_527

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
l9685(金币+5,VIP+0):能不能有个具体点的方法?谢谢
切下目的分子量胶块，放入相应透析袋中灌入电泳缓冲液，电泳至胶块由蓝变透明，弃去胶块，泡透析液中过夜，中间换一到两次透析液，冰冻干燥收集粉末
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2008-06-25 08:49:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zyk_527 at 2008-6-25 08:49:
切下目的分子量胶块，放入相应透析袋中灌入电泳缓冲液，电泳至胶块由蓝变透明，弃去胶块，泡透析液中过夜，中间换一到两次透析液，冰冻干燥收集粉末

我做的基本方法相同，就是最后没有干燥，只是浓缩而已

如果有制备型跑胶设备就好了
赞一下 回复此楼
4楼2008-06-25 08:56:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

puma2003

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zyk_527 at 2008-6-25 08:49:
切下目的分子量胶块，放入相应透析袋中灌入电泳缓冲液，电泳至胶块由蓝变透明，弃去胶块，泡透析液中过夜，中间换一到两次透析液，冰冻干燥收集粉末

放透析袋中怎么个电泳法？能不能给说一下，谢谢
赞一下 回复此楼
5楼2008-06-25 09:38:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxhy

木虫 (正式写手)
转膜然后洗脱
回复此楼
6楼2008-06-25 09:39:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l9685

金虫 (小有名气)
我想问问如果电泳透析回收率由多少?
赞一下 回复此楼
7楼2008-06-25 16:32:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zyk_527

银虫 (小有名气)
在普通SDS—PAGE上、下电泳槽中加入适量的电洗脱液，将装好的透析袋放入上槽中，再装好电泳槽，100 V电压，洗脱2 h(建议最后将电极接反，再跑5-10分钟）。洗脱完毕后，将透析袋中溶液取出，并弃去碎胶，溶液用SDS—PAGE电泳检查效果。鉴定后正确的蛋白溶液装入透析袋中，用PBS溶液于4℃下透析过夜。其间换PBS溶液2～3次。透析好的蛋白冻干浓缩。
回收率，俺觉得极低。有个30-40%就不错了
赞一下 回复此楼
8楼2008-06-27 21:06:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 l9685 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +6 349506619 2026-08-28 6/300 2026-08-31 08:43 by kingkocxr
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 能否申诉？ +6 echo8914667 2026-08-30 7/350 2026-08-31 08:41 by kingkocxr
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭