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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎样从聚丙烯酰胺上回收蛋白
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l9685

金虫 (小有名气)

[交流] 怎样从聚丙烯酰胺上回收蛋白

我想从PAGE胶回收蛋白,不知道有什么方法比较好,希望各位帮帮忙~谢谢!
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1楼 2008-06-24 22:27:38
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sohu123456

捐助贵宾 (小有名气)

摘抄别人论文中的方法

10%SDS-PAGE分离纯化蛋白，考马斯亮蓝染色。然后用干净的刀片小心切下目的蛋白条带，将胶块先用100μl 50mM的NH4HCO3和100μl 50%CH3CN洗30min，后用50mM NH4HCO3溶液洗30min，以除去考马斯亮蓝染料。将脱色后的胶块冷冻干燥后，送样进行质谱分析
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2楼2008-06-24 22:35:26
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zyk_527

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
l9685(金币+5,VIP+0):能不能有个具体点的方法?谢谢
切下目的分子量胶块，放入相应透析袋中灌入电泳缓冲液，电泳至胶块由蓝变透明，弃去胶块，泡透析液中过夜，中间换一到两次透析液，冰冻干燥收集粉末
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3楼2008-06-25 08:49:41
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jasco

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zyk_527 at 2008-6-25 08:49:
切下目的分子量胶块，放入相应透析袋中灌入电泳缓冲液，电泳至胶块由蓝变透明，弃去胶块，泡透析液中过夜，中间换一到两次透析液，冰冻干燥收集粉末

我做的基本方法相同，就是最后没有干燥，只是浓缩而已

如果有制备型跑胶设备就好了
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4楼2008-06-25 08:56:24
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zyk_527 at 2008-6-25 08:49:
切下目的分子量胶块，放入相应透析袋中灌入电泳缓冲液，电泳至胶块由蓝变透明，弃去胶块，泡透析液中过夜，中间换一到两次透析液，冰冻干燥收集粉末

放透析袋中怎么个电泳法？能不能给说一下，谢谢
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5楼2008-06-25 09:38:07
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wxhy

木虫 (正式写手)
转膜然后洗脱
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6楼2008-06-25 09:39:42
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l9685

金虫 (小有名气)
我想问问如果电泳透析回收率由多少?
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7楼2008-06-25 16:32:54
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zyk_527

银虫 (小有名气)
在普通SDS—PAGE上、下电泳槽中加入适量的电洗脱液，将装好的透析袋放入上槽中，再装好电泳槽，100 V电压，洗脱2 h(建议最后将电极接反，再跑5-10分钟）。洗脱完毕后，将透析袋中溶液取出，并弃去碎胶，溶液用SDS—PAGE电泳检查效果。鉴定后正确的蛋白溶液装入透析袋中，用PBS溶液于4℃下透析过夜。其间换PBS溶液2～3次。透析好的蛋白冻干浓缩。
回收率，俺觉得极低。有个30-40%就不错了
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8楼2008-06-27 21:06:23
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