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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » SSR聚丙烯酰胺胶发黑原因
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青竹w

新虫 (初入文坛)

[求助] SSR聚丙烯酰胺胶发黑原因 已有1人参与

各位大神大家好，本人是做SSR分子标记的，6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测后图片如下，为何图片发黑呀？急需帮助，已经试验2个月了没有结果，还请各位大神指点

SSR聚丙烯酰胺胶发黑原因
照片IMG_20150117_140929.jpg


SSR聚丙烯酰胺胶发黑原因-1
照片IMG_20150126_133333.jpg


SSR聚丙烯酰胺胶发黑原因-2
照片IMG_20150126_133437.jpg


SSR聚丙烯酰胺胶发黑原因-3
照片IMG_20150126_133501.jpg
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1楼 2015-03-22 00:11:55
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wanglei8851

银虫 (小有名气)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-03-26 10:45:04
可能染色显色时间长，一般染色也就8-12分钟，染色液500ml水也就0.5g硝酸银，显色时甲醛不能多，一般也就2-3ml即可，多的话显色太快了，不过从有些带可以看出可能有些DNA降解了，建议刚开始做可以先拿琼脂糖检测下，再用这个检测。
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2楼2015-03-26 09:22:57
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tommylike

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2015-03-26 10:45:08
青竹w: 金币+5, ★有帮助, 谢谢 2015-04-03 22:18:05
染色时间长，Ag浓度高。
我们自己的方案，你可以参考下。
脱色与固定：电泳结束后，小心分开两块玻璃板，胶会紧紧粘在涂有Binding Silance的玻璃板上。
冲洗：1L去离子水槽内漂洗胶板1min左右；
染色：加入1L染色液（含1g AgNO3）中，轻轻摇动染色10min；
冲洗：1L去离子水漂洗胶板10s，立即放入显影液中；
显影：把冲洗过的胶板放入到1L显影液（含NaOH216.5g，甲醛4ml）中水平摇床轻摇，直至黄色带纹清晰出现；
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duanliqiong
3楼2015-03-26 09:52:27
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青竹w

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wanglei8851 at 2015-03-26 09:22:57
可能染色显色时间长，一般染色也就8-12分钟，染色液500ml水也就0.5g硝酸银，显色时甲醛不能多，一般也就2-3ml即可，多的话显色太快了，不过从有些带可以看出可能有些DNA降解了，建议刚开始做可以先拿琼脂糖检测下， ...

谢谢，刚看到一直不会看消息    :sweat
我明天试试，您方便留个联系方式吗，我想请教
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4楼2015-04-03 22:14:33
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小生物虫虫

木虫 (小有名气)

范大将军
银染太久了
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潜伏中···
5楼2015-09-17 10:56:33
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白杨89

新虫 (初入文坛)
染色时间太长，或者是Ag浓度太大，也可能是上样量太大，或者是PCR时模板的浓度太大，扩增的效果太好了！！！！！
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6楼2015-09-17 13:22:58
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duanliqiong

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by tommylike at 2015-03-26 09:52:27
染色时间长，Ag浓度高。
我们自己的方案，你可以参考下。
脱色与固定：电泳结束后，小心分开两块玻璃板，胶会紧紧粘在涂有Binding Silance的玻璃板上。
冲洗：1L去离子水槽内漂洗胶板1min左右；
染色：加入1L染 ...

1L显影液中NaOH216.5g？会不会太多，NaOH的量的多少对显色什么影响呀，初次接触不太明白，请指教，谢谢！
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7楼2016-02-19 15:35:52
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