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| 本人本科生，目前做书虱的种内鉴定。前几天用引物扩增ITS序列，电泳出现条带，但是送去公司检测，说亮带里有比较乱，无法测序。现在用引物扩增cytb序列，却发现根本没有条带，目前很郁闷，求解释为什么cytb扩不出条带。（之前老师也做过几次，同样没有条带）退火温度为40.0 41.2 43.9 47.7 52.6 56.5 58.8 60.0“℃。 |
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木虫 (正式写手)
小虫
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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模板长度是多少，退火温度偏低吧（但是还是和模板长度有关的） 引物特异性是否有保证呢？ 检测亮带里乱，应该是杂带太多了吧，建议扩增使用高PCR试剂盒，选酶挺关键（ Hot start Taq，LA，Fussion） |
2楼2015-03-20 11:10:50