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| 本人本科生,目前做书虱的种内鉴定。前几天用引物扩增ITS序列,电泳出现条带,但是送去公司检测,说亮带里有比较乱,无法测序。现在用引物扩增cytb序列,却发现根本没有条带,目前很郁闷,求解释为什么cytb扩不出条带。(之前老师也做过几次,同样没有条带)退火温度为40.0 41.2 43.9 47.7 52.6 56.5 58.8 60.0“℃。 |
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18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
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【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
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模板长度是多少,退火温度偏低吧(但是还是和模板长度有关的) 引物特异性是否有保证呢? 检测亮带里乱,应该是杂带太多了吧,建议扩增使用高PCR试剂盒,选酶挺关键( Hot start Taq,LA,Fussion) |

2楼2015-03-20 11:10:50












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