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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 谁知道 用 triton x-100 低浓度时 会破坏细胞核么？
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356163976

金虫 (小有名气)

[求助] 谁知道 用 triton x-100 低浓度时 会破坏细胞核么？已有3人参与

我想破坏细胞质膜等， 就是保留细胞核， 其他的全部破坏掉。  应该用什么裂解掖好？   使用 triton 低浓度时，  能不能只破坏细胞膜等，但是 不破坏细胞核？
另外 triton本身能完全裂解细胞么，比如高浓度 ，也能破坏细胞核么？

希望 内行人解答，谢谢！ 本人没经验。。。
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1楼2015-03-17 23:05:58
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356163976

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-03-19 22:22:22
你做的是小分子那估计就没啥希望了，小分子都是自由扩散的，提取细胞核的过程中估计就扩散出来了
用蔗糖密度梯度离心看看小分子是不是和细胞核在同一层里...

那到还好，药物结合在dna上或者其他核内蛋白， 最后用异丙醇破坏细胞核，同时也能类似于萃取将药物提炼出来溶于异丙醇。主要 是 我现在不确定   到底能不能  先只破膜， 留下细胞核，    最后再  专门破碎细胞核。
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12楼2015-03-20 21:47:33
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zjf710

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-03-22 09:55:30
Triton x-100会破坏所有的膜结构，所以你想破坏细胞膜，不损伤核膜，最好使用碾磨法破细胞膜。
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三人行，必有我师焉
2楼2015-03-18 02:49:15
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356163976

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zjf710 at 2015-03-18 02:49:15
Triton x-100会破坏所有的膜结构，所以你想破坏细胞膜，不损伤核膜，最好使用碾磨法破细胞膜。

我想用很低浓度triton会不会好点？ 通常你用多少浓度破坏细胞， 1%？ 0。1%？
但是如果降低到0.02%之类或者更低， 会不会好点？ 因为 用研磨法，会造成细胞膜的大碎片也会随着细胞核一起离心下来把，这样细胞核就不纯了，我想加点triton会不会溶解掉膜，就不会离心下来了，  你觉得呢？
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3楼2015-03-19 01:06:46
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zjf710

金虫 (著名写手)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-03-22 09:57:24
引用回帖:
3楼: Originally posted by 356163976 at 2015-03-19 01:06:46
我想用很低浓度triton会不会好点？ 通常你用多少浓度破坏细胞， 1%？ 0。1%？
但是如果降低到0.02%之类或者更低， 会不会好点？ 因为 用研磨法，会造成细胞膜的大碎片也会随着细胞核一起离心下来把，这样细胞核就 ...

应该问题不大。可以碾磨后，用含0.1%的SDS的缓冲液洗脱，可能效果更好些。摸条件试试，在显微镜下观察细胞核，作为评价指标。
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三人行，必有我师焉
4楼2015-03-19 01:38:51
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