应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化相关问题-无法转化成功
52/1返回列表
查看: 2239  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yuman0709

铁虫 (初入文坛)

[求助] 转化相关问题-无法转化成功 已有8人参与

最近做转化，一直转化不成功！酶切用的是BamHI 和EcoRI ，质粒是PET-28a，宿主是大肠，做了好几批转化了，转化的平板就是没有菌。我将感受态涂布，平板上不长菌，转化空载，平板上会有很多菌，说明感受态没问题吧。我进行双酶切验证，酶也没问题，我对目的基因进行双酶切并纯化后，进行跑胶，有条带，说明是有目的基因的。接下来只有连接酶了，接连两次用的都是新酶，转化的平板上就是没有菌落，这是为什么？我的思路错哪了？实验一直没有进展，急！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-03-17 09:06:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuman0709

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 紫玉涵轩 at 2015-03-18 17:44:55
我也遇到过不长菌的情况，做了不下十次，最多有2个菌，师兄说可能是我的片段对大肠杆菌有毒性作用，不知道你是不是这个原因啊？

对的，目的基因表达的蛋白是有毒的，但我曾经转化成功过，其他人也能转化成功。我其实主要是想通过对易错PCR条件进行摸索，来确定一个条件，进行提高酶活或产量的，但就是卡在这里了，一直转化未成功，不知怎么办，对易错PCR条件进行摸索，进行了好几个月了，一直没有进展。。。该怎么办？
赞一下 回复此楼
13楼2015-03-19 22:04:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

qiaobethy

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
LZ试一下换一下酶切的酶。感觉问题是酶的问题。
赞一下 回复此楼
屈从于现实的温暖
2楼2015-03-17 09:11:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉原因只有一个了，就是你的目的片段切不动。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
3楼2015-03-17 09:26:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuman0709

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qiaobethy at 2015-03-17 09:11:08
LZ试一下换一下酶切的酶。感觉问题是酶的问题。

弱弱的问，LZ是什么东东？双酶切验证的时候没有问题啊，酶切可以切开的
赞一下 回复此楼
4楼2015-03-17 09:26:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 11:58 by xSrQNSSjcgoX
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 11:36 by xSrQNSSjcgoX
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 6/300 2026-11-15 02:59 by xSrQNSSjcgoX
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 9/450 2026-11-15 02:04 by xSrQNSSjcgoX
[文学芳草园] 厉娜 +4 张丹枫1991 2026-11-09 6/300 2026-11-15 00:48 by Equinoxhua
[考博] 27博士 +6 锦鲤送福至 2026-11-10 6/300 2026-11-14 21:23 by xupeii
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-13 11:04 by Equinoxhua
[考博] 27博士申请（市政/环境） +3 ladf 2026-11-12 3/150 2026-11-13 08:19 by Equinoxhua
[考博] 27博士申请 +5 白白白ly 2026-11-09 5/250 2026-11-13 05:01 by wlf1982
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:33 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:38 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:36 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:27 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 7/350 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:32 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 9/450 2026-11-12 09:24 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 czAiolzR0IJC 2026-11-10 5/250 2026-11-12 06:36 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:00 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 4/200 2026-11-12 02:23 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 7/350 2026-11-12 00:44 by 9fOTqj074tIg
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭