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lulonghai

金虫 (小有名气)

[求助] 基线问题 已有3人参与

最近做3.1类原料药,仪器为Waters ACQUITY UPLC , 色谱柱为常规的色谱柱,采用的流动相为0.05%TFA水和0.05%TFA乙腈,在220nm波长下0.05%TFA乙腈:0.05%TFA水(90:10)时,基线非常难看,波动很大, 像进了气泡样。而在260nm下看此段基线非常平稳,因此可以排除进了气泡问题,我尝试按相同梯度用乙腈:水走,基线非常平稳。所以我怀疑是TFA引起的,如此如何解决呢?我的流动相条件如下:图谱见附件。
时间(min) 0.05%TFA乙腈 0.05%TFA水
0 10% 90%
10 40% 60%
25 90% 10%
50 90% 10%
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  • 附件 1 : blank_solution-220nm.pdf
  • 2015-03-12 14:21:00, 74.01 K
  • 附件 2 : 220nm放大图.pdf
  • 2015-03-12 14:21:05, 78.34 K
  • 附件 3 : blank_solution-260nm.pdf
  • 2015-03-12 14:21:09, 74.76 K

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lulonghai

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by greensail at 2015-03-13 15:03:09
乙腈比例大点,感觉挺正常的,就是随着乙腈比例的增大,基线起伏大,试剂杂质,系统里的脏东西出了些小峰

可是基线不好会影响积分的,因为现在没做破坏性试验,万一有个杂质产生在那区域,就不好判断了。还有TFA在低波长条件下使用确实不好,但找不到合适的酸来代替,甲酸,醋酸在低波长下都有吸收,而磷酸我调到PH2主峰峰形就是差,很明显不如TFA。
7楼2015-03-13 15:22:34
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cenlm

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lulonghai(星海慧儿代发): 金币+1, 多谢回帖交流 2015-03-13 21:11:12
梯度变化太大,是否有必要这么宽的梯度?
加油
2楼2015-03-12 15:05:43
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xiaomomo83

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lulonghai(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2015-03-13 21:11:28
lulonghai: 金币+5 2015-03-16 09:31:00
在220nm波长下,三氟乙酸是有吸收的。走梯度肯定会出现严重的基线波动。如果你不是走液质,建议你换成磷酸盐吧,它在低波长没有吸收。效果可能好很多,或者直接先用磷酸水试试,直接调你要的PH值。此外,我也感觉目前梯度还可以优化的。楼主先这么试试,有效了记得来反馈

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3楼2015-03-12 15:34:12
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lulonghai

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaomomo83 at 2015-03-12 15:34:12
在220nm波长下,三氟乙酸是有吸收的。走梯度肯定会出现严重的基线波动。如果你不是走液质,建议你换成磷酸盐吧,它在低波长没有吸收。效果可能好很多,或者直接先用磷酸水试试,直接调你要的PH值。此外,我也感觉目前 ...

以前就试过醋酸铵缓冲液(PH5.70)和0.1%磷酸水溶液(PH2.0),主峰峰形差拖尾,没TFA好。用TFA空白溶液在220nm都会出些小杂质峰,疑跟TFA的折射率有关。我用的TFA是HPLC级的
4楼2015-03-12 16:45:01
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