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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » Gateway LR Reaction遇到问题，求大神指导
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qbailj

铁虫 (小有名气)

[交流] Gateway LR Reaction遇到问题，求大神指导

最近做LR反应，总是不长菌，我用的体系是3ul，1ul Entry clone，1ul Destinnation Vector，1ul TE。再加0.5ul酶，室温下反应3小时左右，然后电转化GV3101农杆菌感受态，感受态是我们自己做的，之前用的很好，应该没有问题。目的载体是pEG203和pGWA43，平板是kan（50ug/ml）和rif（25ug/ml）双抗抗性。
不知道是哪里出了问题，求大神指导一下，感谢！
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1楼 2015-03-11 10:33:36
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hmz2007

银虫 (正式写手)
★
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3楼: Originally posted by starseacow at 2015-09-26 18:01:35
楼主最好先转大肠杆菌，扩培之后再提质粒转农杆菌。LR反应对Entry clone和vector浓度都有要求，至少要在100 ng/ul以上，同时根据提质粒方法，应对DNA进行纯化，推荐用PEG纯化。

你好，冒昧请问您有没有ccdB Survival的菌株，比如DB3.1，能不能资助我一些呢？或者怎么个交换呢？我之前从别处找来了，但是他们似乎弄丢了原始的空白菌株，送过来的已经带了质粒。我一直分离不出。所以只好再次请求了。本来要从invitrogen购买，但是人家说不卖菌株。谢谢
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4楼2015-11-27 21:37:08
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lechang

新虫 (初入文坛)
★
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你好，你的问题现在解决了吗？我的LR反应也出问题了。
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2楼2015-09-26 17:16:34
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
★
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楼主最好先转大肠杆菌，扩培之后再提质粒转农杆菌。LR反应对Entry clone和vector浓度都有要求，至少要在100 ng/ul以上，同时根据提质粒方法，应对DNA进行纯化，推荐用PEG纯化。
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hmz2007
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
3楼2015-09-26 18:01:35
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科研新手

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2015-09-26 18:01:35
楼主最好先转大肠杆菌，扩培之后再提质粒转农杆菌。LR反应对Entry clone和vector浓度都有要求，至少要在100 ng/ul以上，同时根据提质粒方法，应对DNA进行纯化，推荐用PEG纯化。

你好，PEG纯化步骤怎么做？

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5楼2018-03-18 10:21:15
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