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qbailj

铁虫 (小有名气)

[交流] Gateway LR Reaction遇到问题,求大神指导

最近做LR反应,总是不长菌,我用的体系是3ul,1ul Entry clone,1ul Destinnation Vector,1ul TE。再加0.5ul酶,室温下反应3小时左右,然后电转化GV3101农杆菌感受态,感受态是我们自己做的,之前用的很好,应该没有问题。目的载体是pEG203和pGWA43,平板是kan(50ug/ml)和rif(25ug/ml)双抗抗性。
不知道是哪里出了问题,求大神指导一下,感谢!
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hmz2007

银虫 (正式写手)


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引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2015-09-26 18:01:35
楼主最好先转大肠杆菌,扩培之后再提质粒转农杆菌。LR反应对Entry clone和vector浓度都有要求,至少要在100 ng/ul以上,同时根据提质粒方法,应对DNA进行纯化,推荐用PEG纯化。

你好,冒昧请问您有没有ccdB Survival的菌株,比如DB3.1,能不能资助我一些呢?或者怎么个交换呢?我之前从别处找来了,但是他们似乎弄丢了原始的空白菌株,送过来的已经带了质粒。我一直分离不出。所以只好再次请求了。本来要从invitrogen购买,但是人家说不卖菌株。谢谢
4楼2015-11-27 21:37:08
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lechang

新虫 (初入文坛)


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你好,你的问题现在解决了吗?我的LR反应也出问题了。
2楼2015-09-26 17:16:34
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starseacow

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主最好先转大肠杆菌,扩培之后再提质粒转农杆菌。LR反应对Entry clone和vector浓度都有要求,至少要在100 ng/ul以上,同时根据提质粒方法,应对DNA进行纯化,推荐用PEG纯化。

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植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2015-09-26 18:01:35
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科研新手

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2015-09-26 18:01:35
楼主最好先转大肠杆菌,扩培之后再提质粒转农杆菌。LR反应对Entry clone和vector浓度都有要求,至少要在100 ng/ul以上,同时根据提质粒方法,应对DNA进行纯化,推荐用PEG纯化。

你好,PEG纯化步骤怎么做?

发自小木虫Android客户端
5楼2018-03-18 10:21:15
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