24小时热门版块排行榜    

查看: 2280  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

qbailj

铁虫 (小有名气)

[交流] Gateway LR Reaction遇到问题,求大神指导

最近做LR反应,总是不长菌,我用的体系是3ul,1ul Entry clone,1ul Destinnation Vector,1ul TE。再加0.5ul酶,室温下反应3小时左右,然后电转化GV3101农杆菌感受态,感受态是我们自己做的,之前用的很好,应该没有问题。目的载体是pEG203和pGWA43,平板是kan(50ug/ml)和rif(25ug/ml)双抗抗性。
不知道是哪里出了问题,求大神指导一下,感谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主最好先转大肠杆菌,扩培之后再提质粒转农杆菌。LR反应对Entry clone和vector浓度都有要求,至少要在100 ng/ul以上,同时根据提质粒方法,应对DNA进行纯化,推荐用PEG纯化。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2015-09-26 18:01:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

lechang

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你好,你的问题现在解决了吗?我的LR反应也出问题了。
2楼2015-09-26 17:16:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hmz2007

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2015-09-26 18:01:35
楼主最好先转大肠杆菌,扩培之后再提质粒转农杆菌。LR反应对Entry clone和vector浓度都有要求,至少要在100 ng/ul以上,同时根据提质粒方法,应对DNA进行纯化,推荐用PEG纯化。

你好,冒昧请问您有没有ccdB Survival的菌株,比如DB3.1,能不能资助我一些呢?或者怎么个交换呢?我之前从别处找来了,但是他们似乎弄丢了原始的空白菌株,送过来的已经带了质粒。我一直分离不出。所以只好再次请求了。本来要从invitrogen购买,但是人家说不卖菌株。谢谢
4楼2015-11-27 21:37:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科研新手

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2015-09-26 18:01:35
楼主最好先转大肠杆菌,扩培之后再提质粒转农杆菌。LR反应对Entry clone和vector浓度都有要求,至少要在100 ng/ul以上,同时根据提质粒方法,应对DNA进行纯化,推荐用PEG纯化。

你好,PEG纯化步骤怎么做?

发自小木虫Android客户端
5楼2018-03-18 10:21:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 我不理解! +8 Edward_pc 2026-08-26 13/650 2026-08-26 15:37 by Tide man
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +4 yuleib84 2026-08-26 5/250 2026-08-26 13:40 by yuleib84
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +4 叶九微 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:52 by xiacongxu
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
信息提示
请填处理意见