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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 碳水化合物 » 多糖分离纯化~~求高手进~~
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Super少

新虫 (初入文坛)

[求助] 多糖分离纯化~~求高手进~~ 已有2人参与

多糖的分离纯化，老师让用HPLC，实验室有Superdex柱子，实验前需要做什么工作啊？问了问师姐，又是缓冲液，又是洗脱液，又是调pH的，全都乱了。老师只说了用HPLC，超纯水洗脱，进行粗分。其他的啥都没说，现在不知道流程啊，机器也没用过。请熟悉实验步骤的，讲一下开始前需要准备什么啊，越具体越好~！时间紧迫，不胜感激啊~~~！！
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1楼 2015-03-09 20:08:56
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喜气_羊羊

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这是我提取枸杞多糖的前处理，枸杞50 g剪碎，置于V（三氯甲烷）：V（甲醇）=2 ：1溶液200 ml、60℃回流脱脂3次，每次2 h，滤除溶剂，残渣挥干溶剂后加入75%乙醇（V/V）200 ml，超声提取2次，每次30min，过滤，待残渣挥干乙醇后加入蒸馏水，超声提取2次，每次30min，过滤，浓缩。加无水乙醇至醇浓度80%，4℃沉淀12h，过滤，并依次再依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，挥干溶剂，溶于去离子水50 ml，并采用Sevag试剂[正丁醇：三氯甲烷=1:4（V/V）]除去蛋白至无沉淀，得到粗多糖。
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2楼2015-03-11 15:52:47
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wellasm

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做分离纯化你的柱子得是制备型的，具体方法你可以咨询卖柱子的，他们公司一般有说明书或总结的分离各种物质的方法，而且做唐的HPLC  你的检测器 必须是 RID  ELSD  或者PAD   ，UV的不行，多糖的分离不好做，祝你好运
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3楼2015-03-11 19:00:44
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