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Super少

新虫 (初入文坛)

[求助] 多糖分离纯化~~求高手进~~ 已有2人参与

多糖的分离纯化,老师让用HPLC,实验室有Superdex柱子,实验前需要做什么工作啊?问了问师姐,又是缓冲液,又是洗脱液,又是调pH的,全都乱了。老师只说了用HPLC,超纯水洗脱,进行粗分。其他的啥都没说,现在不知道流程啊,机器也没用过。请熟悉实验步骤的,讲一下开始前需要准备什么啊,越具体越好~!时间紧迫,不胜感激啊~~~!!
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喜气_羊羊

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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这是我提取枸杞多糖的前处理,枸杞50 g剪碎,置于V(三氯甲烷):V(甲醇)=2 :1溶液200 ml、60℃回流脱脂3次,每次2 h,滤除溶剂,残渣挥干溶剂后加入75%乙醇(V/V)200 ml,超声提取2次,每次30min,过滤,待残渣挥干乙醇后加入蒸馏水,超声提取2次,每次30min,过滤,浓缩。加无水乙醇至醇浓度80%,4℃沉淀12h,过滤,并依次再依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤,挥干溶剂,溶于去离子水50 ml,并采用Sevag试剂[正丁醇:三氯甲烷=1:4(V/V)]除去蛋白至无沉淀,得到粗多糖。
2楼2015-03-11 15:52:47
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wellasm

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做分离纯化你的柱子得是制备型的,具体方法你可以咨询卖柱子的,他们公司一般有说明书或总结的分离各种物质的方法,而且做唐的HPLC  你的检测器 必须是 RID  ELSD  或者PAD   ,UV的不行,多糖的分离不好做,祝你好运
3楼2015-03-11 19:00:44
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