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tingy1986

金虫 (正式写手)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 957.7
散金: 640
帖子: 630
在线: 59.6小时
虫号: 3228887
注册: 2014-05-23
性别: GG
专业: 脑血管结构、功能异常及相

[求助] 才刚刚学养细胞，老板又要我细胞荧光染色，不知道操作有无误，心里没底，前来求助。已有3人参与

有前辈用过BCECF-AM荧光染色染料吗？才刚刚学养细胞，又要我荧光染色，心里没底，前来求助。
试剂终于配好了，在life买的BCECF-AM。和配套用的pHi缓冲液kit。试剂已经配好了，上周也实践了一次。由于我们实验室其他人也没有做过这个实验。所以也不能给我多好的建议。所以前来求教。哪怕是一点经验也好。
我就想问问我的操作方面，有没有不对的地方。
如果有不对的地方，希望指导指导我。十分感谢。
我是这样做的
1，细胞培养皿的培养液吸掉
2，pbs洗一遍
3，pbs吸掉
4，trypsin 1ml 37度培养箱3分钟
5，加入培养基（fbs 10%）吹打成细胞悬液
6，离心 1000rpm 3分钟
7，吸掉培养基
8，加入pbs 吹打成细胞悬液
9，离心 1000rpm 3分钟
10，吸掉pbs。
11，加入pbs 10ml 吹打成细胞悬液
12，分装到1.5ml的 tube里。
13，离心3000rpm 3分钟
14，吸掉pbs。
15，从1.5ml的tube里，转移一部分细胞到96孔well。
16，37度培养箱20分钟
17，放入酶标仪分析。
由于我从来没有接触过培养细胞技术这些，网上也看了一些材料，感觉不太相信自己，所以请达人前辈们帮忙指点迷津，由于想测活细胞内的ph值。尽可能希望细胞状态好点的坚持到酶标仪这一步。不知道该如何操作更好一点。
谢谢。

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