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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 才刚刚学养细胞，老板又要我细胞荧光染色，不知道操作有无误，心里没底，前来求助。
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tingy1986

金虫 (正式写手)

[求助] 才刚刚学养细胞，老板又要我细胞荧光染色，不知道操作有无误，心里没底，前来求助。 已有3人参与

有前辈用过BCECF-AM荧光染色染料吗？才刚刚学养细胞，又要我荧光染色，心里没底，前来求助。
试剂终于配好了，在life买的BCECF-AM。和配套用的pHi缓冲液kit。 试剂已经配好了，上周也实践了一次。由于我们实验室其他人也没有做过这个实验。所以也不能给我多好的建议。所以前来求教。哪怕是一点经验也好。
我就想问问我的操作方面，有没有不对的地方。
如果有不对的地方，希望指导指导我。十分感谢。
我是这样做的
1，细胞培养皿的培养液吸掉
2，pbs洗一遍
3，pbs吸掉
4，trypsin 1ml 37度培养箱3分钟
5，加入培养基（fbs 10%）吹打成细胞悬液
6，离心 1000rpm 3分钟
7，吸掉培养基
8，加入pbs 吹打成细胞悬液
9，离心 1000rpm 3分钟
10，吸掉pbs。
11，加入pbs 10ml 吹打成细胞悬液
12，分装到1.5ml的 tube里。
13，离心3000rpm 3分钟
14，吸掉pbs。
15，从1.5ml的tube里，转移一部分细胞到96孔well。
16，37度培养箱20分钟
17，放入酶标仪分析。
由于我从来没有接触过培养细胞技术这些，网上也看了一些材料，感觉不太相信自己，所以请达人前辈们帮忙指点迷津，由于想测活细胞内的ph值。尽可能希望细胞状态好点的坚持到酶标仪这一步。 不知道该如何操作更好一点。
谢谢。
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1楼 2015-03-09 09:49:40
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从始至终只见你不断离心细胞，就没见你用染料，这是搞什么？
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4楼2015-03-11 17:51:54
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普通回帖

tingy1986

金虫 (正式写手)
2楼2015-03-09 10:19:43
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tingy1986

金虫 (正式写手)
3楼2015-03-09 11:31:42
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tingy1986

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2015-03-11 17:51:54
从始至终只见你不断离心细胞，就没见你用染料，这是搞什么？

抱歉。写的步骤错了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2015-03-11 19:07:46
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sweetquanlin

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你用细胞荧光染色是染细胞膜还是细胞核？
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6楼2015-04-07 09:59:07
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tingy1986

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sweetquanlin at 2015-04-07 09:59:07
你用细胞荧光染色是染细胞膜还是细胞核？

用的BCECF染料，应该染的是细胞内脂质。
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7楼2015-04-08 09:58:06
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1229069024

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好 请问你后来还有做这个吗 我有类似的问题想要请教你
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8楼2017-04-07 13:53:35
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我是呵呵呵

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 1229069024 at 2017-04-07 13:53:35
你好 请问你后来还有做这个吗 我有类似的问题想要请教你

你好，请问你做出来了吗？我想想你请教一下
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9楼2017-07-14 15:08:03
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我是呵呵呵

新虫 (小有名气)
你好请问你做出来了吗？我想请教一下

发自小木虫Android客户端
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10楼2017-07-14 16:13:05
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