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tingy1986金虫 (正式写手)
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[求助]
才刚刚学养细胞，老板又要我细胞荧光染色，不知道操作有无误，心里没底，前来求助。 已有3人参与
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有前辈用过BCECF-AM荧光染色染料吗？才刚刚学养细胞，又要我荧光染色，心里没底，前来求助。 试剂终于配好了，在life买的BCECF-AM。和配套用的pHi缓冲液kit。 试剂已经配好了，上周也实践了一次。由于我们实验室其他人也没有做过这个实验。所以也不能给我多好的建议。所以前来求教。哪怕是一点经验也好。 我就想问问我的操作方面，有没有不对的地方。 如果有不对的地方，希望指导指导我。十分感谢。 我是这样做的 1，细胞培养皿的培养液吸掉 2，pbs洗一遍 3，pbs吸掉 4，trypsin 1ml 37度培养箱3分钟 5，加入培养基（fbs 10%）吹打成细胞悬液 6，离心 1000rpm 3分钟 7，吸掉培养基 8，加入pbs 吹打成细胞悬液 9，离心 1000rpm 3分钟 10，吸掉pbs。 11，加入pbs 10ml 吹打成细胞悬液 12，分装到1.5ml的 tube里。 13，离心3000rpm 3分钟 14，吸掉pbs。 15，从1.5ml的tube里，转移一部分细胞到96孔well。 16，37度培养箱20分钟 17，放入酶标仪分析。 由于我从来没有接触过培养细胞技术这些，网上也看了一些材料，感觉不太相信自己，所以请达人前辈们帮忙指点迷津，由于想测活细胞内的ph值。尽可能希望细胞状态好点的坚持到酶标仪这一步。 不知道该如何操作更好一点。 谢谢。 |
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