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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA提取问题
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cherishjy

木虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-10-19 09:03:03
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5楼: Originally posted by hibi at 2015-03-04 19:17:49
但就是不见18sRNA和 28sRNA条带，在胶上看到的都是RNA降解的状态。我个人觉得有可能是：1.样本组织里面的RNA降解的 2.提取过程RNA降解   3跑胶的过程降解
为了解决第一个可能问题： 我又取了新鲜的肝脏组织去提取 ...

请问你楼主后来怎么处理的，我也遇到这样的问题了，260/280是正常的，但是跑胶就是显示很亮的一个拖尾样的条带。
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11楼2016-10-18 16:20:35
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by cherishjy at 2016-10-18 16:20:35
请问你楼主后来怎么处理的，我也遇到这样的问题了，260/280是正常的，但是跑胶就是显示很亮的一个拖尾样的条带。...

260/280正常不代表你做的没有降解，注意保持冷环境和紫外消毒才能保证没有拖尾
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奋斗是我们前进的动力！
12楼2016-10-19 09:03:49
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cherishjy

木虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-21 09:47:06
引用回帖:
12楼: Originally posted by xn8008 at 2016-10-19 09:03:49
260/280正常不代表你做的没有降解，注意保持冷环境和紫外消毒才能保证没有拖尾...

RNA提取是冷环境呀，可是跑胶怎么保证呢？

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13楼2016-10-20 09:10:11
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel
引用回帖:
13楼: Originally posted by cherishjy at 2016-10-20 09:10:11
RNA提取是冷环境呀，可是跑胶怎么保证呢？
...

跑胶一般半个小时足矣，为了好看，你可以跑一个小时，但跑胶的效果还是反映你提取RNA的质量
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14楼2016-10-20 09:52:50
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cherishjy

木虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-21 09:47:12
引用回帖:
14楼: Originally posted by xn8008 at 2016-10-20 09:52:50
跑胶一般半个小时足矣，为了好看，你可以跑一个小时，但跑胶的效果还是反映你提取RNA的质量...

我用100v跑了30min结果显示降解了，之前也跑过一次同样的条件条带很好，最近提了几批都是降解。

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15楼2016-10-20 22:52:07
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by cherishjy at 2016-10-20 22:52:07
我用100v跑了30min结果显示降解了，之前也跑过一次同样的条件条带很好，最近提了几批都是降解。
...

那估计是上个可能原因，第一你用的东西可能被污染了，含有RNA酶，第二你的样品本身RNA少了，自身发生降解，保存不善，反复冻融，第三是你的试剂有问题，不是有过期的就是有可能有的被污染了，或者本身试剂天然就不好

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16楼2016-10-20 23:14:41
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2226451226

金虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-21 09:47:20
RNA的完整性以电泳结果为准，我总用普通的琼脂糖凝胶电泳200v跑15分钟，效果还不错

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17楼2016-10-20 23:23:42
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简单小幸福

新虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-21 09:47:26
引用回帖:
4楼: Originally posted by hibi at 2015-03-04 18:11:18
但就是不见18sRNA和 28sRNA条带，在胶上看到的都是RNA降解的状态。我个人觉得有可能是：1.样本组织里面的RNA降解的 2.提取过程RNA降解   3跑胶的过程降解
为了解决第一个可能问题： 我又取了新鲜的肝脏组织去提取 ...

可能是上样量太大了，减少点样量，可能会好些

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18楼2016-10-20 23:30:21
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简单小幸福

新虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-21 09:47:32
引用回帖:
6楼: Originally posted by 赌侠紫麒麟 at 2015-04-04 22:58:31
楼主不知道问题解决了没有，我今天晚上做实验提的RNA也降解了，后来分析可能是提取液加完后，未能立即加入氯仿/异戊醇，未能及时除去RNA酶，导致RNA酶将RNA给降解了，这只是一个猜测啊，毕竟这只是实验分析，还没有 ...

在提取液里面是不会被降解的

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19楼2016-10-20 23:32:22
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简单小幸福

新虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-21 09:47:38
引用回帖:
19楼: Originally posted by 简单小幸福 at 2016-10-20 23:32:22
在提取液里面是不会被降解的
...

我们有时候都把样品保存在TRiol(提取液)里面

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20楼2016-10-20 23:33:03
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