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cherishjy

木虫 (小有名气)

xn8008: 欢迎发帖交流 2016-10-19 09:03:03
引用回帖:
5楼: Originally posted by hibi at 2015-03-04 19:17:49
但就是不见18sRNA和 28sRNA条带,在胶上看到的都是RNA降解的状态。我个人觉得有可能是:1.样本组织里面的RNA降解的 2.提取过程RNA降解   3跑胶的过程降解
为了解决第一个可能问题: 我又取了新鲜的肝脏组织去提取 ...

请问你楼主后来怎么处理的,我也遇到这样的问题了,260/280是正常的,但是跑胶就是显示很亮的一个拖尾样的条带。
11楼2016-10-18 16:20:35
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

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11楼: Originally posted by cherishjy at 2016-10-18 16:20:35
请问你楼主后来怎么处理的,我也遇到这样的问题了,260/280是正常的,但是跑胶就是显示很亮的一个拖尾样的条带。...

260/280正常不代表你做的没有降解,注意保持冷环境和紫外消毒才能保证没有拖尾
奋斗是我们前进的动力!
12楼2016-10-19 09:03:49
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cherishjy

木虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-21 09:47:06
引用回帖:
12楼: Originally posted by xn8008 at 2016-10-19 09:03:49
260/280正常不代表你做的没有降解,注意保持冷环境和紫外消毒才能保证没有拖尾...

RNA提取是冷环境呀,可是跑胶怎么保证呢?

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13楼2016-10-20 09:10:11
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

引用回帖:
13楼: Originally posted by cherishjy at 2016-10-20 09:10:11
RNA提取是冷环境呀,可是跑胶怎么保证呢?
...

跑胶一般半个小时足矣,为了好看,你可以跑一个小时,但跑胶的效果还是反映你提取RNA的质量
奋斗是我们前进的动力!
14楼2016-10-20 09:52:50
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cherishjy

木虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-21 09:47:12
引用回帖:
14楼: Originally posted by xn8008 at 2016-10-20 09:52:50
跑胶一般半个小时足矣,为了好看,你可以跑一个小时,但跑胶的效果还是反映你提取RNA的质量...

我用100v跑了30min结果显示降解了,之前也跑过一次同样的条件条带很好,最近提了几批都是降解。

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15楼2016-10-20 22:52:07
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by cherishjy at 2016-10-20 22:52:07
我用100v跑了30min结果显示降解了,之前也跑过一次同样的条件条带很好,最近提了几批都是降解。
...

那估计是上个可能原因,第一你用的东西可能被污染了,含有RNA酶,第二你的样品本身RNA少了,自身发生降解,保存不善,反复冻融,第三是你的试剂有问题,不是有过期的就是有可能有的被污染了,或者本身试剂天然就不好

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奋斗是我们前进的动力!
16楼2016-10-20 23:14:41
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2226451226

金虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-21 09:47:20
RNA的完整性以电泳结果为准,我总用普通的琼脂糖凝胶电泳200v跑15分钟,效果还不错

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17楼2016-10-20 23:23:42
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简单小幸福

新虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-21 09:47:26
引用回帖:
4楼: Originally posted by hibi at 2015-03-04 18:11:18
但就是不见18sRNA和 28sRNA条带,在胶上看到的都是RNA降解的状态。我个人觉得有可能是:1.样本组织里面的RNA降解的 2.提取过程RNA降解   3跑胶的过程降解
为了解决第一个可能问题: 我又取了新鲜的肝脏组织去提取 ...

可能是上样量太大了,减少点样量,可能会好些

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18楼2016-10-20 23:30:21
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简单小幸福

新虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-21 09:47:32
引用回帖:
6楼: Originally posted by 赌侠紫麒麟 at 2015-04-04 22:58:31
楼主不知道问题解决了没有,我今天晚上做实验提的RNA也降解了,后来分析可能是提取液加完后,未能立即加入氯仿/异戊醇,未能及时除去RNA酶,导致RNA酶将RNA给降解了,这只是一个猜测啊,毕竟这只是实验分析,还没有 ...

在提取液里面是不会被降解的

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19楼2016-10-20 23:32:22
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简单小幸福

新虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-21 09:47:38
引用回帖:
19楼: Originally posted by 简单小幸福 at 2016-10-20 23:32:22
在提取液里面是不会被降解的
...

我们有时候都把样品保存在TRiol(提取液)里面

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20楼2016-10-20 23:33:03
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