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yw的小号

铁虫 (小有名气)

[求助] 求biotin连接catalase的详细实验报告,实在不行avidin连catalase的也行 已有1人参与

求biotin连接catalase的详细实验报告,实在没有biotin的话,avidin连catalase的也行
最好是亲测可用的!

手头上有biotin-NHS 溶解在DMF里,catalase粉末,avidin溶解在PBS里,另有其他基本试剂(试剂质量和纯度绝对靠谱)。
试过好几篇文章的方法。连是连上了,但是产率很低,哪位大神正好做过这个,求指点,和详细实验步骤。

十分感谢!!
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chongju135

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yw的小号 at 2015-02-26 23:26:19
谢谢您的回答!
先试试EDC/NHS的,如果试剂都用完了还达不到效果就换您说的。
另:一般biotin和蛋白的摩尔比是多少啊,书里写的2-20不等,文献里有超过200的

继续等大神回复!!...

这需要看你打算绑定多少个biotin而定,如果你用的是EDC/NHS的话,要看蛋白表面的K是否多了,我以前用过1:20的,能连上5个左右,质谱能显示1~7个,最多的在4,5吧。2~20,我觉得最少都要5倍的量。如果你用巯基的话用3倍量就行了!
4楼2015-02-26 23:35:20
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chongju135

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
记得thermo试剂中有其他的biotin试剂,EDC/NHS的效果比较差,可以试试巯基偶联。
2楼2015-02-25 20:35:53
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yw的小号

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chongju135 at 2015-02-25 20:35:53
记得thermo试剂中有其他的biotin试剂,EDC/NHS的效果比较差,可以试试巯基偶联。

谢谢您的回答!
先试试EDC/NHS的,如果试剂都用完了还达不到效果就换您说的。
另:一般biotin和蛋白的摩尔比是多少啊,书里写的2-20不等,文献里有超过200的

继续等大神回复!!
3楼2015-02-26 23:26:19
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yw的小号

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by chongju135 at 2015-02-26 23:35:20
这需要看你打算绑定多少个biotin而定,如果你用的是EDC/NHS的话,要看蛋白表面的K是否多了,我以前用过1:20的,能连上5个左右,质谱能显示1~7个,最多的在4,5吧。2~20,我觉得最少都要5倍的量。如果你用巯基的 ...

谢谢您的再次回答,我想绑定的biotin越多越好,另外还有两个问题想请教

1。用EDC|NHS的话,如果是avidin连catalase, 能连上几个catalase呢?(需要连接上尽量多的catalase)
2。巯基连接的话,您有推荐的文章吗?

再次感谢
5楼2015-03-02 17:15:28
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