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yw的小号

铁虫 (小有名气)

[求助] 求biotin连接catalase的详细实验报告，实在不行avidin连catalase的也行 已有1人参与

求biotin连接catalase的详细实验报告，实在没有biotin的话，avidin连catalase的也行
最好是亲测可用的！

手头上有biotin-NHS 溶解在DMF里，catalase粉末，avidin溶解在PBS里，另有其他基本试剂（试剂质量和纯度绝对靠谱）。
试过好几篇文章的方法。连是连上了，但是产率很低，哪位大神正好做过这个，求指点，和详细实验步骤。

十分感谢！！
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1楼 2015-02-25 18:37:48
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chongju135

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
记得thermo试剂中有其他的biotin试剂，EDC／NHS的效果比较差，可以试试巯基偶联。
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2楼2015-02-25 20:35:53
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yw的小号

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chongju135 at 2015-02-25 20:35:53
记得thermo试剂中有其他的biotin试剂，EDC／NHS的效果比较差，可以试试巯基偶联。

谢谢您的回答！
先试试EDC／NHS的，如果试剂都用完了还达不到效果就换您说的。
另：一般biotin和蛋白的摩尔比是多少啊，书里写的2-20不等，文献里有超过200的

继续等大神回复！！
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3楼2015-02-26 23:26:19
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chongju135

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yw的小号 at 2015-02-26 23:26:19
谢谢您的回答！
先试试EDC／NHS的，如果试剂都用完了还达不到效果就换您说的。
另：一般biotin和蛋白的摩尔比是多少啊，书里写的2-20不等，文献里有超过200的

继续等大神回复！！...

这需要看你打算绑定多少个biotin而定，如果你用的是EDC／NHS的话，要看蛋白表面的K是否多了，我以前用过1:20的，能连上5个左右，质谱能显示1～7个，最多的在4，5吧。2～20，我觉得最少都要5倍的量。如果你用巯基的话用3倍量就行了！
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4楼2015-02-26 23:35:20
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yw的小号

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chongju135 at 2015-02-26 23:35:20
这需要看你打算绑定多少个biotin而定，如果你用的是EDC／NHS的话，要看蛋白表面的K是否多了，我以前用过1:20的，能连上5个左右，质谱能显示1～7个，最多的在4，5吧。2～20，我觉得最少都要5倍的量。如果你用巯基的 ...

谢谢您的再次回答，我想绑定的biotin越多越好，另外还有两个问题想请教

1。用EDC|NHS的话，如果是avidin连catalase， 能连上几个catalase呢？（需要连接上尽量多的catalase）
2。巯基连接的话，您有推荐的文章吗？

再次感谢
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5楼2015-03-02 17:15:28
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