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tmty

金虫 (著名写手)

[求助] ELISA测定一类物质的含量? 已有1人参与

已经测定所得的抗体对几种物质具有较高的交叉反应率,怎样用ELISA法去测定这几种物质的总含量?
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静夜思雨
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GKV1301

铁虫 (初入文坛)

好像不行吧?
2楼2015-02-28 10:13:37
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tmty

金虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by GKV1301 at 2015-02-28 10:13:37
好像不行吧?

我看到有些文献上报道是可以的,以CR为100%的物质作标准曲线进行检测。
静夜思雨
3楼2015-02-28 11:39:58
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寂静之林

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
tmty: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢! 2015-02-28 15:21:46
tmty: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2015-03-04 12:52:23
假设一下,你的抗体特异性测定物质A,但是该抗体存在对物质B、C、D的交叉反应,假设抗体对物质B、C、D的交叉反应分别是B(50%),C(30%),D(20%)。
现在楼主是想用这对抗体在ELISA中去测定某物质X中,物质A、B、C、D的总含量?
如果已知物质X只含有物质A、B、C、D中的一种,那你可以测定那种物质的总量的。
如果物质X含有物质A、B、C、D中两种或两种以上,那就不能测定物质X中所含有的物质A、B、C、D的总量。因为通过ELISA实验,你可以得到物质X的OD值,但是你不能确定是物质A、B、C、D的哪种或哪几种导致了该OD值的产生。举个例子,假设因为通过ELISA实验,你得到物质X的OD值为1,再假设物质A为100mg时,其OD值为1,那么物质X(OD值=1)含有物质A、B、C、D的量可能会有:100mg的A(总量:100mg),50mg的A+100mg的B(总量:150mg),50mgA+50mg的B+83mg的C(总量:183mg),25mg的A+60mgB+40mg的C+165mg的D(总量:290)等等,有无数种可能性,而且每一种可能性的总量都不同,所以根本就无法确定物质X中所含有的物质A、B、C、D的总量。
4楼2015-02-28 11:44:19
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tmty

金虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 寂静之林 at 2015-02-28 11:44:19
假设一下,你的抗体特异性测定物质A,但是该抗体存在对物质B、C、D的交叉反应,假设抗体对物质B、C、D的交叉反应分别是B(50%),C(30%),D(20%)。
现在楼主是想用这对抗体在ELISA中去测定某物质X中,物质A、B ...

感谢你的热情解答,我有个疑问,你说假设物质A为100mg时,其OD值为1,那么物质X(OD值=1)含有物质A、B、C、D的量可能会有:100mg的A(总量:100mg),这个可以理解。
但是对于 50mg的A+100mg的B(总量:150mg),50mgA+50mg的B+83mg的C(总量:183mg),25mg的A+60mgB+40mg的C+165mg的D(总量:290),这几种可能性,为什么其OD值为1?
静夜思雨
5楼2015-02-28 15:42:26
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寂静之林

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by tmty at 2015-02-28 15:42:26
感谢你的热情解答,我有个疑问,你说假设物质A为100mg时,其OD值为1,那么物质X(OD值=1)含有物质A、B、C、D的量可能会有:100mg的A(总量:100mg),这个可以理解。
但是对于 50mg的A+100mg的B(总量:150mg), ...

你看看,我前面假设了抗体对物质B、C、D的交叉反应分别是B(50%),C(30%),D(20%)。而抗体对物质A的检测能力则为100%。
50mg的A+100mg的B(总量:150mg)=A贡献了50mg的OD值,B贡献了100mg*50%=50mg的OD值,加起来就是100mg的物质A的OD值。
同理,50mg的A+50mg的B+83mg的C(总量:183mg)就是50mg+50*50%+83*30%=100mg,对应的就是物质A100mg的OD值;
25mg的A+60mgB+40mg的C+165mg的D=25*100%+60+50%+40*30%+165*20%=100mg,对应的就是物质A100mg的OD值。
6楼2015-03-04 12:19:45
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