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silviasj

金虫 (著名写手)

[交流] 求助转化问题

目的基因用HindIII和BamHI双切后,与HindIII和BamHI双切后的pWB980连接后转化枯草芽孢杆菌DB104,转化子验证,HindIII单切后,不到500bp处和3700bp处有两条带;BamHI单切后,4200bp处有一条带;HindIII和BamHI双切后,不到500bp处和3700bp处有两条带。请高人指教这是怎么回事?

[ Last edited by silviasj on 2008-6-13 at 21:34 ]
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superwheat

银虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silviasj(金币+10,VIP+0):谢谢~!
那就是说单酶切4200bp其实也并不符合你的要求咯。
还少了1100bp的一大段
那我觉得目标基因中间还可能有不止一个HindIII/BamHI的位点。
当初你设计引物的时候有没有考虑过限制性酶的选择?

通常内切酶对引物上的酶切位点效率比较低,而片断中间的酶切位点活性比较高
所以我觉得即使酶切不完全,也是有限把中间的位点切掉了。
9楼2008-06-14 14:18:42
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superwheat

银虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+10,VIP+0):代谢
reasonspare(金币+0,VIP+0):楼主还有问题,你再看看。
其实我觉得直接去测个序比较方便,有了序列什么都好分析
2楼2008-06-14 01:45:11
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sevenlight967

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+10,VIP+0):代谢
reasonspare(金币+0,VIP+0):楼主还有问题,你再看看。
似乎你目的基因里面有个HINDIII的位点啊。

一开始克隆到载体前目的基因你可能切的不完全,所以这个位点在后面暴露出来了。
3楼2008-06-14 05:21:06
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silviasj

金虫 (著名写手)

谢谢各位虫友,我会去测个序并分析一下的~!
4楼2008-06-14 10:47:27
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