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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助转化问题
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silviasj

金虫 (著名写手)

[交流] 求助转化问题

目的基因用HindIII和BamHI双切后，与HindIII和BamHI双切后的pWB980连接后转化枯草芽孢杆菌DB104，转化子验证，HindIII单切后，不到500bp处和3700bp处有两条带；BamHI单切后，4200bp处有一条带；HindIII和BamHI双切后，不到500bp处和3700bp处有两条带。请高人指教这是怎么回事？

[ Last edited by silviasj on 2008-6-13 at 21:34 ]
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1楼 2008-06-13 21:17:32
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sevenlight967

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+10,VIP+0):代谢
reasonspare(金币+0,VIP+0):楼主还有问题，你再看看。
似乎你目的基因里面有个HINDIII的位点啊。

一开始克隆到载体前目的基因你可能切的不完全，所以这个位点在后面暴露出来了。
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3楼2008-06-14 05:21:06
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superwheat

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+10,VIP+0):代谢
reasonspare(金币+0,VIP+0):楼主还有问题，你再看看。
其实我觉得直接去测个序比较方便，有了序列什么都好分析
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2楼2008-06-14 01:45:11
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silviasj

金虫 (著名写手)
谢谢各位虫友，我会去测个序并分析一下的~！
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4楼2008-06-14 10:47:27
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silviasj

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by sevenlight967 at 2008-6-14 05:21:
似乎你目的基因里面有个HINDIII的位点啊。

一开始克隆到载体前目的基因你可能切的不完全，所以这个位点在后面暴露出来了。

可是我的目的基因里要是有HINDIII的话，我双酶切后应该有两个片段，一个带有HIND的双位点，一个带有BAM和HIND的双位点，而我的载体是被HIND和BAM双切的，只会连接有HIND和BAM的双位点的目的基因，这时候用HIND单切的话不会有500的那条带啊，只会和BAM单切时一样在4200处有带，对吗？
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5楼2008-06-14 11:04:32
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