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[交流] 求助转化问题

目的基因用HindIII和BamHI双切后，与HindIII和BamHI双切后的pWB980连接后转化枯草芽孢杆菌DB104，转化子验证，HindIII单切后，不到500bp处和3700bp处有两条带；BamHI单切后，4200bp处有一条带；HindIII和BamHI双切后，不到500bp处和3700bp处有两条带。请高人指教这是怎么回事？

[ Last edited by silviasj on 2008-6-13 at 21:34 ]

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1楼 2008-06-13 21:17:32

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引用回帖:

Originally posted by sevenlight967 at 2008-6-14 05:21:
似乎你目的基因里面有个HINDIII的位点啊。

一开始克隆到载体前目的基因你可能切的不完全，所以这个位点在后面暴露出来了。

可是我的目的基因里要是有HINDIII的话，我双酶切后应该有两个片段，一个带有HIND的双位点，一个带有BAM和HIND的双位点，而我的载体是被HIND和BAM双切的，只会连接有HIND和BAM的双位点的目的基因，这时候用HIND单切的话不会有500的那条带啊，只会和BAM单切时一样在4200处有带，对吗？