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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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silviasj

金虫 (著名写手)

[交流] 求助转化问题

目的基因用HindIII和BamHI双切后,与HindIII和BamHI双切后的pWB980连接后转化枯草芽孢杆菌DB104,转化子验证,HindIII单切后,不到500bp处和3700bp处有两条带;BamHI单切后,4200bp处有一条带;HindIII和BamHI双切后,不到500bp处和3700bp处有两条带。请高人指教这是怎么回事?

[ Last edited by silviasj on 2008-6-13 at 21:34 ]
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silviasj

金虫 (著名写手)

回楼上的,首先谢谢你的关注与回答,其实这个基因已经有前面的师兄连接到了穿梭载体上,只是表达量不够,所以希望能连在980上直接转进枯草当中去提高表达量,前面师兄构建的时候也是这两个酶切位点,一样的基因,已经成功构建,所以说如果基因上有这些酶切位点,他也不能构建成功是吧?你说呢?
10楼2008-06-14 14:41:16
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superwheat

银虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+10,VIP+0):代谢
reasonspare(金币+0,VIP+0):楼主还有问题,你再看看。
其实我觉得直接去测个序比较方便,有了序列什么都好分析
2楼2008-06-14 01:45:11
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sevenlight967

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+10,VIP+0):代谢
reasonspare(金币+0,VIP+0):楼主还有问题,你再看看。
似乎你目的基因里面有个HINDIII的位点啊。

一开始克隆到载体前目的基因你可能切的不完全,所以这个位点在后面暴露出来了。
3楼2008-06-14 05:21:06
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silviasj

金虫 (著名写手)

谢谢各位虫友,我会去测个序并分析一下的~!
4楼2008-06-14 10:47:27
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