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柚子要努力

新虫 (初入文坛)

[求助] 外周血DNA提取及细胞冻存的问题 已有2人参与

各位大神,楼主准备从全血中提取DNA做PCR,但是目前还处于留样阶段,先将各种样品保存下来,可能半年或者一年之后才用,请问应该如何保存?
全血中的DNA肯定来自白细胞,那是应该先把白细胞分离出来冻存,还是全血直接冻存?
冻存的时候需要加什么冷冻保护剂么?
有木有人做过啊,快来指点我!谢谢!!!
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柚子要努力

新虫 (初入文坛)

没有人么??、
2楼2015-02-22 20:54:56
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
youlinglyw: 金币+32, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2015-03-03 09:57:42
全血直接冻存,不用加保护液!

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-02-22 21:43:07
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ligy6

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2015-03-03 09:57:50
柚子要努力: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-03-04 20:49:19
全血直接冻存,如果半年或者一年之后才用,最好用-80℃超低温冰箱冻存,至少用-40℃低温冰箱冻存。或者可以随时用新鲜血液提取DNA,然后冻存DNA,这样好一些。
4楼2015-02-23 23:09:31
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柚子要努力

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ptttmt at 2015-02-22 21:43:07
全血直接冻存,不用加保护液!

不加保护液的话细胞不会被破坏么?会不会提dna的时候效率降低啊?
5楼2015-03-02 23:08:48
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柚子要努力

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ligy6 at 2015-02-23 23:09:31
全血直接冻存,如果半年或者一年之后才用,最好用-80℃超低温冰箱冻存,至少用-40℃低温冰箱冻存。或者可以随时用新鲜血液提取DNA,然后冻存DNA,这样好一些。

是直接放入-80还是需要先放入-20预冻之类的啊?
6楼2015-03-02 23:10:07
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ligy6

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 柚子要努力 at 2015-03-02 23:10:07
是直接放入-80还是需要先放入-20预冻之类的啊?...

需要先放入-20℃冷冻,之后再放入-80℃超低温冰箱,主要是直接放入-80℃超低温冰箱后,由于一般试管都不耐低温,会炸裂。如果选用质量比较好的试管,也可以直接-80℃超低温冰箱冻存,可以自己试一试。提取 DNA以新鲜血液为佳,冷冻后细胞会破坏,但DNA存在于细胞核中,不会受到影响。
7楼2015-03-03 00:31:16
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