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guoxingjun2008金虫 (正式写手)
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[交流]
求高手解释一下基因敲出技术
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| 各位金虫,银虫等等所有的高手们,本人刚刚涉及试验,老板要用潮霉素的一个基因标记取代另一个基因的ORF的主要部分,这属不属于基因敲除技术?我应该怎么去实现这一步,不胜感激!! |
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guohuayin
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我也想问下基因敲除中，敲除后要用标记基因进行筛选，那么此标志基因是需要表达的吧？常见的选择性标记基因主要有3类：第1类为药物抗性标记基因，第2类为营养缺陷型标记基因，第3类为功能标记基因。实验有关基因敲除方面，就是在目的基因中插入选择标记基因，致使目的基因失活，通过选择标志筛选转化子。想问的问题是： A、对于第1类在载体上的抗性基因，比如在它的上游插入某个基因片段，下游也插入某个基因片段，要使它能在真菌中表达，是不是要保证上游插入的碱基数不影响它的阅读框架？ B、对于第2类营养缺陷型标记基因，一方面，与A同样的问题；另一方面，它是不是可以不管上游碱基多少个，只要有标记基因，它就能与缺陷型菌同源重组，就能正常表达，使受体细胞表现野生型生长？ |
7楼2008-06-13 09:08:10
lybio
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