24小时热门版块排行榜    

查看: 317  |  回复: 5
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 tch1984_ren 的 2 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

tch1984_ren

铜虫 (小有名气)

[交流] DNA Ladder求助!!!急!

我在做一个药物凋亡肿瘤细胞凋亡的实验,提了好几次DNA,总是出现涂片状,貌似坏死,但类似的文章好多做Ladder都成功了,关键是我的负对照(没加药)也出现涂片,感觉是提取DNA过程出现了问题,有时沉淀不出来DNA,我的提取过程大致是:胰酶消化后PBS洗涤,400ul 裂解液4度裂解15分钟,之后加入蛋白酶PK消化蛋白质三个小时,最后用等体积异丙醇沉淀过夜.用的是GoldView染色的,1.2%的琼脂糖凝胶,电压是55V,电泳五个小时.做的过程中发现溶液非常粘稠,加异丙醇后很难混匀,不混匀的话又沉淀不下去.哪位高手要是有好的意见的话还请帮忙解决下,万分感激了!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hfztim

至尊木虫 (正式写手)

1.你提DNA的方法有点小问题,你可以在沉淀DNA以前加等体积的酚氯仿沉淀一下蛋白。
2.细胞可能没发生凋亡。
4楼2008-06-10 17:20:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

tch1984_ren

铜虫 (小有名气)

附加说明: 我也试过用酚仿抽提蛋白,溶液太粘稠,根本就没法转移上清,蛋白总是跟着转移,而且也没多少蛋白能沉淀出来.是不是溶液的粘稠带来的提取失败?
2楼2008-06-09 18:11:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackeyedliming

感觉好像是有蛋白质残留
3楼2008-06-10 09:52:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tch1984_ren

铜虫 (小有名气)

我也试着去深沉蛋白了,但溶液还是太粘稠,根本没法把蛋白去除,一吸就全跟着跑到上清去了,在文献里看到别人有这样做的.
5楼2008-06-10 18:52:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见