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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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tch1984_ren

铜虫 (小有名气)

[交流] DNA Ladder求助!!!急!

我在做一个药物凋亡肿瘤细胞凋亡的实验,提了好几次DNA,总是出现涂片状,貌似坏死,但类似的文章好多做Ladder都成功了,关键是我的负对照(没加药)也出现涂片,感觉是提取DNA过程出现了问题,有时沉淀不出来DNA,我的提取过程大致是:胰酶消化后PBS洗涤,400ul 裂解液4度裂解15分钟,之后加入蛋白酶PK消化蛋白质三个小时,最后用等体积异丙醇沉淀过夜.用的是GoldView染色的,1.2%的琼脂糖凝胶,电压是55V,电泳五个小时.做的过程中发现溶液非常粘稠,加异丙醇后很难混匀,不混匀的话又沉淀不下去.哪位高手要是有好的意见的话还请帮忙解决下,万分感激了!
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tch1984_ren

铜虫 (小有名气)

附加说明: 我也试过用酚仿抽提蛋白,溶液太粘稠,根本就没法转移上清,蛋白总是跟着转移,而且也没多少蛋白能沉淀出来.是不是溶液的粘稠带来的提取失败?
2楼2008-06-09 18:11:03
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blackeyedliming

感觉好像是有蛋白质残留
3楼2008-06-10 09:52:51
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hfztim

至尊木虫 (正式写手)

1.你提DNA的方法有点小问题,你可以在沉淀DNA以前加等体积的酚氯仿沉淀一下蛋白。
2.细胞可能没发生凋亡。
4楼2008-06-10 17:20:23
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tch1984_ren

铜虫 (小有名气)

我也试着去深沉蛋白了,但溶液还是太粘稠,根本没法把蛋白去除,一吸就全跟着跑到上清去了,在文献里看到别人有这样做的.
5楼2008-06-10 18:52:56
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blackeyedliming

引用回帖:
Originally posted by tch1984_ren at 2008-6-10 18:52:
我也试着去深沉蛋白了,但溶液还是太粘稠,根本没法把蛋白去除,一吸就全跟着跑到上清去了,在文献里看到别人有这样做的.

不要太贪心啦,稍息一点儿
6楼2008-06-16 08:52:34
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