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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yuzhoumeinv

银虫 (初入文坛)

[求助] wb问题请教 已有2人参与

我今天做的wb,应该是有S6K、磷酸化S6K、S6、磷酸化S6,结果显影什么也没有,请问会是什么原因?后来我用一块胶显影1分钟,勉强能看到S6K,但是同一行有的深有的浅,我操作上有什么失误吗?
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yuzhoumeinv: 金币+1, 有帮助 2015-02-05 09:49:14
磷酸化的蛋白相对来说比较难做,wb不成功有很多原因,首先可能是抗体本身的效价不好,可以调整一二抗的比例,其次就是在wb过程中的操作问题,比如蛋白的含量,转膜调节,或者抗体孵育的问题,还需注意的一个问题是显影过程,一般显影时加上显影液后一定要先反应一会(一到两分钟左右),然后再进行压片,如果1分不够,就继续增加压片时间,但如果你压了半个小时仍然没有显出,那你就重新做吧。
医学&统计学
2楼2015-02-01 11:23:12
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yuzhoumeinv

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2015-02-01 11:23:12
磷酸化的蛋白相对来说比较难做,wb不成功有很多原因,首先可能是抗体本身的效价不好,可以调整一二抗的比例,其次就是在wb过程中的操作问题,比如蛋白的含量,转膜调节,或者抗体孵育的问题,还需注意的一个问题是显 ...

请问转膜过程需要注意的有什么呢
3楼2015-02-01 21:22:20
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废哥117

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yuzhoumeinv at 2015-02-01 21:22:20
请问转膜过程需要注意的有什么呢...

转膜过程中需要注意的有很多,恒流or恒压转膜效果都不同,转膜温度控制,PVDF膜的激活,膜与胶的贴合是否有气泡,转膜的时间与分子量大小,膜的孔径,转膜液的配制也至关重要,反正要注意的很多,转膜是个细活,你要慢慢积累经验
不断提高自己
4楼2015-02-02 11:22:04
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yuzhoumeinv

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 废哥117 at 2015-02-02 11:22:04
转膜过程中需要注意的有很多,恒流or恒压转膜效果都不同,转膜温度控制,PVDF膜的激活,膜与胶的贴合是否有气泡,转膜的时间与分子量大小,膜的孔径,转膜液的配制也至关重要,反正要注意的很多,转膜是个细活,你 ...

5楼2015-02-03 09:28:52
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
磷酸化的抗体还是cst的比较好     细胞裂解液要加磷酸酶抑制剂
6楼2015-02-03 19:28:30
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