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yuzhoumeinv

银虫 (初入文坛)

[求助] wb问题请教已有2人参与

我今天做的wb,应该是有S6K、磷酸化S6K、S6、磷酸化S6,结果显影什么也没有,请问会是什么原因?后来我用一块胶显影1分钟,勉强能看到S6K,但是同一行有的深有的浅,我操作上有什么失误吗?
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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yuzhoumeinv: 金币+1, 有帮助 2015-02-05 09:49:14
磷酸化的蛋白相对来说比较难做,wb不成功有很多原因,首先可能是抗体本身的效价不好,可以调整一二抗的比例,其次就是在wb过程中的操作问题,比如蛋白的含量,转膜调节,或者抗体孵育的问题,还需注意的一个问题是显影过程,一般显影时加上显影液后一定要先反应一会(一到两分钟左右),然后再进行压片,如果1分不够,就继续增加压片时间,但如果你压了半个小时仍然没有显出,那你就重新做吧。
医学&统计学
2楼2015-02-01 11:23:12
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