应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白过镍柱，出现大量沉淀，请教各位
182/2返回列表上一页12
查看: 3282  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zzlei

金虫 (小有名气)
这个是这次跑胶的条带，最粗的那条就是350洗下来的，基本都沉淀了
蛋白过镍柱，出现大量沉淀，请教各位
MediaLib_Camera Roll_WP_20150201_002.jpg
赞一下 回复此楼
11楼2015-02-01 09:04:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzlei

金虫 (小有名气)
晚上拍的照片，实验楼门卫催着让走，就急拍了张，还没洗脱得很明显，前面那一块也有条带的，没拍好
赞一下 回复此楼
12楼2015-02-01 09:06:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pengyun2521

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
zzlei: 金币+2, ★有帮助 2015-02-01 16:29:57
目的蛋白沉淀与离子浓度和pH都有一定的关系，你可以看看目的蛋白的等电点，试试调节一下pH值或是改变一下缓冲液的离子浓度。
赞一下 回复此楼
不积跬步无以至千里！
13楼2015-02-01 09:35:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzlei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lxgnh166 at 2015-01-30 08:51:58
你的PH是多少，每个蛋白都有个合适的PH,PH不合适回导致沉淀，NI层析你也可以考虑PH梯度洗脱。

Hepes 7.5，以前师兄都用这个做的，能做出来，我一做就沉淀了
赞一下 回复此楼
14楼2015-02-01 09:47:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzlei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by pengyun2521 at 2015-02-01 09:35:23
目的蛋白沉淀与离子浓度和pH都有一定的关系，你可以看看目的蛋白的等电点，试试调节一下pH值或是改变一下缓冲液的离子浓度。

求解怎么知道蛋白的等电点？我蛋白都纯化不出来怎么测
赞一下 回复此楼
15楼2015-02-01 10:14:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzlei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by pengyun2521 at 2015-02-01 09:35:23
目的蛋白沉淀与离子浓度和pH都有一定的关系，你可以看看目的蛋白的等电点，试试调节一下pH值或是改变一下缓冲液的离子浓度。

现在问题是师兄他们做出来的不沉淀，我做了好几次都沉淀了。。。有点怀疑自己操作哪儿出问题了。。。是挑菌时粘了太多固体培养基？还是超声？我觉得可能是我在纯化的某个步骤就把蛋白弄的变性了。。。但又不知道是哪步出了问题。。。现在真真切切的觉得自己不是做科研的料，但老板又对我抱有很大期望，我得拼命努力，脑子笨又学不好。。。纠结。我原本是化学出身，生物这边真是现学现弄，很多都搞不懂
赞一下 回复此楼
16楼2015-02-01 10:19:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pengyun2521

木虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by zzlei at 2015-02-01 10:14:17
求解怎么知道蛋白的等电点？我蛋白都纯化不出来怎么测...

网上预测，

ExPASy
回复此楼
不积跬步无以至千里！
17楼2015-02-01 15:06:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by pennchem at 2015-01-28 21:12:42
先用低浓度的咪唑洗掉杂质，然后用EDTA洗脱你的蛋白，如果蛋白可溶，然后透析去掉EDTA以及Ni（II）
镍柱重生一次就好了。

请问  EDTA多大浓度会把蛋白洗脱下来？
赞一下 回复此楼
18楼2016-03-21 10:01:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zzlei 的主题更新
182/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-13 11:04 by Equinoxhua
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 7/350 2026-11-13 10:55 by Equinoxhua
[考博] 27博士申请（市政/环境） +3 ladf 2026-11-12 3/150 2026-11-13 08:19 by Equinoxhua
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-13 04:21 by Equinoxhua
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 czAiolzR0IJC 2026-11-10 6/300 2026-11-12 16:55 by zzy933268
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 6/300 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 7/350 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:38 by HajghKOMynmz
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:53 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 gRND4NVAZ8VG 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:42 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-12 06:03 by 9fOTqj074tIg
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:30 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:30 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:19 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:08 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:00 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 9/450 2026-11-12 04:57 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 7/350 2026-11-12 00:44 by 9fOTqj074tIg
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭