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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白过镍柱，出现大量沉淀，请教各位
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zzlei

金虫 (小有名气)
这个是这次跑胶的条带，最粗的那条就是350洗下来的，基本都沉淀了
蛋白过镍柱，出现大量沉淀，请教各位
MediaLib_Camera Roll_WP_20150201_002.jpg
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11楼2015-02-01 09:04:01
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zzlei

金虫 (小有名气)
晚上拍的照片，实验楼门卫催着让走，就急拍了张，还没洗脱得很明显，前面那一块也有条带的，没拍好
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12楼2015-02-01 09:06:08
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pengyun2521

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
zzlei: 金币+2, ★有帮助 2015-02-01 16:29:57
目的蛋白沉淀与离子浓度和pH都有一定的关系，你可以看看目的蛋白的等电点，试试调节一下pH值或是改变一下缓冲液的离子浓度。
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不积跬步无以至千里！
13楼2015-02-01 09:35:23
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zzlei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lxgnh166 at 2015-01-30 08:51:58
你的PH是多少，每个蛋白都有个合适的PH,PH不合适回导致沉淀，NI层析你也可以考虑PH梯度洗脱。

Hepes 7.5，以前师兄都用这个做的，能做出来，我一做就沉淀了
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14楼2015-02-01 09:47:36
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zzlei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by pengyun2521 at 2015-02-01 09:35:23
目的蛋白沉淀与离子浓度和pH都有一定的关系，你可以看看目的蛋白的等电点，试试调节一下pH值或是改变一下缓冲液的离子浓度。

求解怎么知道蛋白的等电点？我蛋白都纯化不出来怎么测
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15楼2015-02-01 10:14:17
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zzlei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by pengyun2521 at 2015-02-01 09:35:23
目的蛋白沉淀与离子浓度和pH都有一定的关系，你可以看看目的蛋白的等电点，试试调节一下pH值或是改变一下缓冲液的离子浓度。

现在问题是师兄他们做出来的不沉淀，我做了好几次都沉淀了。。。有点怀疑自己操作哪儿出问题了。。。是挑菌时粘了太多固体培养基？还是超声？我觉得可能是我在纯化的某个步骤就把蛋白弄的变性了。。。但又不知道是哪步出了问题。。。现在真真切切的觉得自己不是做科研的料，但老板又对我抱有很大期望，我得拼命努力，脑子笨又学不好。。。纠结。我原本是化学出身，生物这边真是现学现弄，很多都搞不懂
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16楼2015-02-01 10:19:20
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pengyun2521

木虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by zzlei at 2015-02-01 10:14:17
求解怎么知道蛋白的等电点？我蛋白都纯化不出来怎么测...

网上预测，

ExPASy
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不积跬步无以至千里！
17楼2015-02-01 15:06:24
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by pennchem at 2015-01-28 21:12:42
先用低浓度的咪唑洗掉杂质，然后用EDTA洗脱你的蛋白，如果蛋白可溶，然后透析去掉EDTA以及Ni（II）
镍柱重生一次就好了。

请问  EDTA多大浓度会把蛋白洗脱下来？
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18楼2016-03-21 10:01:51
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