| 查看: 2574 | 回复: 17 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
zzlei金虫 (小有名气)
|
[求助]
蛋白过镍柱，出现大量沉淀，请教各位已有1人参与
|
|
|
破碎离心完之后推滤了一下，然后过镍柱，分别用20mL 20mM咪唑（25mM Tris，100mM NaCl)、80mM咪唑、150mM咪唑、350mM咪唑、500mM咪唑洗脱，发现自150mM就能洗出目的蛋白，但杂蛋白也很多。350mM洗脱时蛋白发生沉淀，且15mL的量基本能把柱子里的蛋白全洗脱下来，500时基本就什么都没有了。 试着将350的沉淀用硫酸铵溶解，但效果不好，透析用25mM Tris，300mM NaCl，仍然沉淀挥之不去。透析一直在4℃下搅拌进行。请教各位高手们，是咪唑浓度太高导致了沉淀？沉淀的蛋白是因为变性而无法再溶解？透析液我分别调了100mM NaCl、200mM、300mM，还适当加了5%、10%甘油试着溶解沉淀，但都没有效果。希望大家帮我分析一下到底是什么原因引起的。纯化N多次了，每次都是350的咪唑就沉淀了 |
回复此楼» 猜你喜欢
导师想让我从独立一作变成了共一第一
已经有8人回复
-
博士读完未来一定会好吗
已经有23人回复
-
到新单位后，换了新的研究方向，没有团队，持续积累2区以上论文，能申请到面上吗
已经有11人回复
-
读博
已经有4人回复
-
JMPT 期刊投稿流程
已经有4人回复
-
心脉受损
已经有5人回复
-
Springer期刊投稿求助
已经有4人回复
-
小论文投稿
已经有3人回复
-
申请2026年博士
已经有6人回复
zzlei
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 804.4
- 散金: 100
- 帖子: 258
- 在线: 83.2小时
- 虫号: 2384026
- 注册: 2013-03-28
- 性别: GG
- 专业: 无机药物化学
16楼2015-02-01 10:19:20
zzlei
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 804.4
- 散金: 100
- 帖子: 258
- 在线: 83.2小时
- 虫号: 2384026
- 注册: 2013-03-28
- 性别: GG
- 专业: 无机药物化学
2楼2015-01-27 10:49:52
zzlei
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 804.4
- 散金: 100
- 帖子: 258
- 在线: 83.2小时
- 虫号: 2384026
- 注册: 2013-03-28
- 性别: GG
- 专业: 无机药物化学
3楼2015-01-27 10:50:47
4楼2015-01-28 14:23:51