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jingxuegood新虫 (正式写手)
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求助土壤酸性磷酸酶活性测定的详细方法~~~ 已有4人参与
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| 试验需要测定土壤酸性磷酸酶活性，想用对硝基苯磷酸二钠比色法，但查到的方法不够详细。有的说要每个样品都要做空白对照，有点没有提及这点；关于标准曲线的测定时加入的试剂也不尽相同，现在很是混乱。望做过相关试验的人士给予详细方法和相关指点，非常感谢！！！ |
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jingxuegood
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3楼2015-01-27 20:25:59
macjr
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土壤磷酸酶（酸性） （一）试剂 1. pH5醋酸盐缓冲液： A:0.2mol/L 醋酸溶液（11.55ml稀释至1000ml） B:0.2mol/L醋酸钠溶液 A液14.8ml+B液35.2ml稀释至100ml 2. 0.5%磷酸苯二钠：pH5醋酸缓冲液 3. 氯代二溴对苯醌亚胺：称取0.125g 2，6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10ml 96%乙醇（48ml乙醇+2ml水）溶解，贮存于棕色瓶中，存放在冰箱中，保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。 4. 酚标准溶液：酚原液---取1g苯酚溶于蒸馏水中，定容至1000ml水中，保存于棕色瓶中。酚工作液---取10ml酚原液稀释至1000ml水中，每毫升含0.01mg酚 5. 甲苯 6. pH9.4硼酸缓冲液：A液：0.05mol/L硼砂 B液：0.2mol/L氢氧化钠 A液50ml+B液11ml 稀释至200ml （二）实验步骤 1. 标线制作 取0，1，3，5，7，9，11，13ml酚工作液，置于50ml比色管中，加入5ml缓冲液（pH9.4硼酸缓冲液）和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定于660nm波长下测定吸光度。 2. 样品测定 称取风干土样（过1mm筛，去除杂质）2.0000g，放置于100ml离心管中，加1ml甲苯，15min后加入20ml 0.5%磷酸苯二钠，仔细摇匀后放置于37°C恒温箱中陪养24h，后培养液中加入50ml蒸馏水离心过滤。吸取滤液1ml于50ml比色管中，按标准曲线方法显色，并测定吸光度。 同时做空白实验和每一土样的无基质对照 （三）数据计算 以24小时每克土壤中释放出酚的毫克数表示 我的方法 |
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jingxuegood4楼2015-01-28 09:12:37
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