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yanzihuaxue

铜虫 (小有名气)

[求助] M.SssI 甲基转移酶 已有4人参与

有哪位大神用过M.SssI 甲基转移酶,请问甲基化时有什么特殊要求吗,为什么我的链甲基化不上
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ptpt1234

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问做出来了么前辈,我的也是甲基化不上,其实都不知道是否甲基化,因为每次做的现象都不一样,很心塞。而只做加切酶的却不会这样
9楼2018-06-06 09:16:46
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yanzihuaxue: 金币+2 2015-01-26 19:51:41
1.在50 µl 推荐的反应缓冲液中,37°C 反应15分钟,1 µl M.SssI保护1 µg 基因组 DNA 不被HpaII消化。
把反应时间加长一些;
2 储存在 -20°C,是不是降解了啊?
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
2楼2015-01-26 17:11:18
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yanzihuaxue

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2015-01-26 17:11:18
1.在50 µl 推荐的反应缓冲液中,37°C 反应15分钟,1 µl M.SssI保护1 µg 基因组 DNA 不被HpaII消化。
把反应时间加长一些;
2 储存在 -20°C,是不是降解了啊?

买的是NEB的酶,在-20℃储存的,就是在推荐的NEB buffer 2 中反应,反应了两个小时,但是没有甲基化上,心塞呀,不知道怎么办了
3楼2015-01-26 19:53:48
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by yanzihuaxue at 2015-01-26 19:53:48
买的是NEB的酶,在-20℃储存的,就是在推荐的NEB buffer 2 中反应,反应了两个小时,但是没有甲基化上,心塞呀,不知道怎么办了...

能不能是酶运输过程中就是降解了啊?
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
4楼2015-01-26 19:57:08
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