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hqj200808

铜虫 (小有名气)

[求助] HPLC分析一种类胡萝卜素的问题 已有6人参与

前两天用HPLC分析了一种类胡萝卜素,选用的流动相为:A为乙腈-水(9:1,v/v);B为乙酸乙酯;所分析的物质为弱极性物质,不知此种流动相是否合理?
另外,样品为经过硅胶柱层析所得样品,硅胶柱为95%的乙醇湿法上柱,洗脱液用的也是95%的乙醇。有两个问题不大明白:
1,洗脱液是否需与装柱的溶剂相同?(比如用乙醇上柱,以其他混合试剂洗脱,这样是否会使收集的目标物质溶于不同的溶液中?)
2,将物质洗脱下来后,转移至容量瓶定容的溶剂有什么要求?是洗脱剂还是溶解标品的溶剂?刚做实验,还望知情的虫虫帮忙解答下。不慎感激。
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
乙酸乙酯不应该用在反相柱梯度洗脱。它与水不互溶,常用的缓冲盐在其中也不溶,会堵塞柱子的。另外它的紫外吸收比较大,会影响检测。

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2015-01-26 07:14:14
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查看全部 15 个回答

匿名

用户注销 (知名作家)

精修问题可私信


感谢参与,应助指数 +1
本帖仅楼主可见
2楼2015-01-25 16:48:03
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hqj200808

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lich666 at 2015-01-25 16:48:03
HPLC用的是正向柱还是反相柱?反相柱没听过用乙酸乙酯走的。。。

用的C18柱,应该属于反相色谱柱了,流动相A与B 线性梯度洗脱,B在20min 从0%-100%。我也觉得奇怪,查资料好像都说乙酸乙酯用于正相色谱的,但不晓得梯度洗脱是否有不同。结果就是出现柱压过高  样品也没跑出来
3楼2015-01-25 20:46:06
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

我只能说用乙酸乙酯是不合理的。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
4楼2015-01-25 20:51:46
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