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hqj200808

铜虫 (小有名气)

[求助] HPLC分析一种类胡萝卜素的问题 已有6人参与

前两天用HPLC分析了一种类胡萝卜素,选用的流动相为:A为乙腈-水(9:1,v/v);B为乙酸乙酯;所分析的物质为弱极性物质,不知此种流动相是否合理?
另外,样品为经过硅胶柱层析所得样品,硅胶柱为95%的乙醇湿法上柱,洗脱液用的也是95%的乙醇。有两个问题不大明白:
1,洗脱液是否需与装柱的溶剂相同?(比如用乙醇上柱,以其他混合试剂洗脱,这样是否会使收集的目标物质溶于不同的溶液中?)
2,将物质洗脱下来后,转移至容量瓶定容的溶剂有什么要求?是洗脱剂还是溶解标品的溶剂?刚做实验,还望知情的虫虫帮忙解答下。不慎感激。
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匿名

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2楼2015-01-25 16:48:03
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hqj200808

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lich666 at 2015-01-25 16:48:03
HPLC用的是正向柱还是反相柱?反相柱没听过用乙酸乙酯走的。。。

用的C18柱,应该属于反相色谱柱了,流动相A与B 线性梯度洗脱,B在20min 从0%-100%。我也觉得奇怪,查资料好像都说乙酸乙酯用于正相色谱的,但不晓得梯度洗脱是否有不同。结果就是出现柱压过高  样品也没跑出来
3楼2015-01-25 20:46:06
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

我只能说用乙酸乙酯是不合理的。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
4楼2015-01-25 20:51:46
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匿名

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5楼2015-01-25 23:50:12
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superyeast

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【答案】应助回帖

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乙酸乙酯不应该用在反相柱梯度洗脱。它与水不互溶,常用的缓冲盐在其中也不溶,会堵塞柱子的。另外它的紫外吸收比较大,会影响检测。

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2015-01-26 07:14:14
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

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流动相使用100%甲醇+1%的二氯甲烷或者100%甲醇+5%异丙醇或者使用C16色谱柱。
7楼2015-01-26 21:04:07
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hqj200808

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by lich666 at 2015-01-25 23:50:12
建议你再查查,别用乙酸乙酯了,乙酸乙酯一高,然后你里面还有水,很可能不互溶啊。...

恩  谢谢,打算用甲醇和水试一下;只是 我分析的物质极性比较小,在选择流动相时是否需考虑下流动相的极性?这对分离效果的影响是什么?
8楼2015-01-27 09:30:08
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hqj200808

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by superyeast at 2015-01-26 07:14:14
乙酸乙酯不应该用在反相柱梯度洗脱。它与水不互溶,常用的缓冲盐在其中也不溶,会堵塞柱子的。另外它的紫外吸收比较大,会影响检测。

恩,谢谢,学习了。分离极性小的物质在选择流动相时主要的原则是什么?就是主要考虑哪些因素的
9楼2015-01-27 09:32:04
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hqj200808

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wyy080214 at 2015-01-26 21:04:07
流动相使用100%甲醇+1%的二氯甲烷或者100%甲醇+5%异丙醇或者使用C16色谱柱。

依据是什么呀?你做过这方面的么?
10楼2015-01-27 09:33:20
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