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哈韩小小猪

新虫 (初入文坛)

[交流] 肿瘤药物IC50与细胞信号通路检测 已有2人参与

想检测5FU在肿瘤细胞的IC50,请问一下各位老师,我是不是要先明确一个作用时间,比如48H后检测MTT,如果我要检测药物作用后信号通路的变化,是不是药物作用的浓度就必须为我测定的IC50,同时我想进一步检查药物处理后细胞信号通路的变化,涉及到提取蛋白,我可以在24小时提取蛋白吗,因为怕在48小时细胞死亡增多,这样提取蛋白检测WESTERN后可能不准确。拜托各位老师了
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Klutzl

铁杆木虫 (职业作家)

小喵


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你测IC50的时候肯定会设置不同的浓度,然后根据这些浓度下细胞存活率的多少就可以知道药物的lc50了,一般来说,提蛋白的话,我们是设置lc50上下两个浓度来加药的,防止药物效果太好而提不到蛋白,我觉得你可以在36小时的时候提蛋白,因为药物作用于细胞的话,一般要有24小时才能走完一个周期的~你可以看看文献上是怎么说的啦~

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如果我不联系你,你也不联系我,那么,最后,我们是不是都成了陌生人?盛开的蒲公英~~~~~~~~~~~
2楼2015-01-25 15:05:45
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哈韩小小猪

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Klutzl at 2015-01-25 15:05:45
你测IC50的时候肯定会设置不同的浓度,然后根据这些浓度下细胞存活率的多少就可以知道药物的lc50了,一般来说,提蛋白的话,我们是设置lc50上下两个浓度来加药的,防止药物效果太好而提不到蛋白,我觉得你可以在36小 ...

谢谢老师的帮助,我还想请教下“IC50上下两个浓度”,还包括IC50吗?
另外我看到文献了直接用IC50的浓度处理细胞,但是流式检测细胞凋亡时候细胞的死亡率并没有达到50%?这样写文章时候会不会解释不清楚。
3楼2015-01-25 20:15:01
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Klutzl

铁杆木虫 (职业作家)

小喵


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引用回帖:
3楼: Originally posted by 哈韩小小猪 at 2015-01-25 20:15:01
谢谢老师的帮助,我还想请教下“IC50上下两个浓度”,还包括IC50吗?
另外我看到文献了直接用IC50的浓度处理细胞,但是流式检测细胞凋亡时候细胞的死亡率并没有达到50%?这样写文章时候会不会解释不清楚。...

包括你的lc50的浓度,文献上所说的是检测细胞凋亡,万一造成细胞死亡的不是由于凋亡完成的呢,也有可能是因为他们在做流式的时候没有和mtt的时间一致所完成的~其实我也不是特别懂

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如果我不联系你,你也不联系我,那么,最后,我们是不是都成了陌生人?盛开的蒲公英~~~~~~~~~~~
4楼2015-01-25 20:26:41
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哈韩小小猪

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Klutzl at 2015-01-25 20:26:41
包括你的lc50的浓度,文献上所说的是检测细胞凋亡,万一造成细胞死亡的不是由于凋亡完成的呢,也有可能是因为他们在做流式的时候没有和mtt的时间一致所完成的~其实我也不是特别懂
...

谢谢啦
5楼2015-01-25 20:30:04
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a238886

禁虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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6楼2015-01-25 22:22:37
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哈韩小小猪

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by a238886 at 2015-01-25 22:22:37
  测IC50 你要设置时间  一般 要24h  也有人做48h的~~

我打算设定48h,因为我想在后期检测药物对细胞周期的影响,这样就可以检测24小时或36小时后细胞周期的变化同时细胞凋亡又不算太多
7楼2015-01-26 09:19:59
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