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月月大可木虫 (著名写手)
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[交流]
测序不一致问题
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今天收到基因公司的测序报告，发现问题很大，请各位虫友帮忙分析。 我通过PCR获得片段A（1.2kb）和B（1.5kb），然后通过重叠PCR（overlap PCR）将两个片段连接起来，再和T载体连接。将A＋B＋T载体送基因公司测序。拿测序报告和我原有的序列比对发现A和B中都有不少单个碱基不一致的地方，并且在B的后半部分有长达十几bp的缺失。我PCR所使用的酶均为pfu高保真酶。 请虫友帮忙分析一下，谢谢！！ |
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