应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答中转子版 » 做过western blot 的进来【有效期至08年7月1日】
51/1返回列表
查看: 191  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

meizhou

木虫 (知名作家)

沉墨于心，不没于物

[交流] 做过western blot 的进来【有效期至08年7月1日】

用的2%的BSA 孵育4度摇床隔夜，2%BSA配制的1：500的R&D公司单克隆一抗孵育一个半小时，2%BSA配制的1：5000的金思特公司HRP二抗孵育一个半小时，Amersham的ECL盒子发光。
结果条带非常清晰，但有很多杂条带，原因是什么？一抗、二抗还需要稀释吗 ？ 还是封闭不够 ？

由于抗体比较昂贵，没做过这方面实验的请不要跟帖，谢谢 ！

[ Last edited by meizhou on 2008-6-5 at 21:52 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
《memory》---BarbaraStreisand
1楼 2008-06-05 17:11:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songshu310

金虫 (小有名气)
★ ★
meizhou(金币+2,VIP+0):tx，我试试这样封闭看
我们这边做，2抗是不能超过一个小时的，另外，不知道 你2抗洗了几次，一般来说多洗几遍比较好，我一般都洗个6，7遍的。
你封闭完了，从冰箱拿出来，在室温下需要放半小时以上的，不知道你是怎样操作的。
赞一下 回复此楼
4楼2008-06-06 10:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

xipha

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
meizhou(金币+3,VIP+0):多谢 ！
如果是背景也比较深，可能是曝光过长
非特异条带的话，可能是二抗稀释得不够（浓度过高），也可能是样品本身的问题（膜脂、糖类、浓度等）
另外，国产单抗要看看是什么动物的抗体，不一定就适合你的样品
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2008-06-05 22:26:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meizhou

木虫 (知名作家)

沉墨于心，不没于物
引用回帖:
Originally posted by xipha at 2008-6-5 22:26:
如果是背景也比较深，可能是曝光过长
非特异条带的话，可能是二抗稀释得不够（浓度过高），也可能是样品本身的问题（膜脂、糖类、浓度等）
另外，国产单抗要看看是什么动物的抗体，不一定就适合你的样品

背景还好。我做的是牛骨胳肌的两个抗原，其中一个单抗一抗用的是人抗，二抗是羊抗人；另一个一抗用的小鼠抗体，二抗是羊抗小鼠。二抗用的1：5000照他们公司技术员的方法做的，我觉得是不是有可能我反应时间有点长（室温1.5小时）？或者漂洗时间短 ？还有可能是孵育封闭不够，我是4度，2%BSA隔夜的（或者浓度不够？）。
多谢您的帮助 ！

[ Last edited by meizhou on 2008-6-6 at 00:14 ]
赞一下 回复此楼
《memory》---BarbaraStreisand
3楼2008-06-06 00:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +29 医学老男孩 2026-08-13 62/3100 2026-08-15 21:35 by 大快人心啦
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +8 majunge000 2026-08-11 10/500 2026-08-15 18:55 by Equinoxhua
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭